关键字：内皮素-2 ELISA KIT（ELISA试剂盒）
中文名：内皮素-2 ELISA KIT（ELISA试剂盒）
英文名：Endothelin-2 [ET-2] ELISA KIT（ELISA试剂盒）
产品类别：ELISA试剂盒
规格：96T
存储：4℃保存6个月
运输方式：快递发货
本公司提供内皮素-2 ELISA KIT（ELISA试剂盒），服务于各大校及科研单位的科研人员，产品用于科研方面，不用于临床诊断。取样量一般为上清液体 500ul ，特殊指标和没经过处理指标可咨询 、另做处理。如需订购请联系24小时为您服务。
试剂盒组成：
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中文名称 |
English name |
96T/48T 含量 |
保存 |
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ELISA酶标板(可拆卸） |
Microelisa stripplate |
8×12 / 8×6 * |
2-8℃ |
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标准品() |
Standard |
1瓶 0.5ml * |
2-8℃ |
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标准品稀释液 |
Standard diluent |
1 瓶 1.5ml * |
2-8℃ |
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酶标试剂 |
HRP-Conjugate reagent |
1 瓶 6 ml/3ml * |
2-8℃ |
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样品稀释液 |
Sample diluent |
1 瓶 6 ml/3ml * |
2-8℃ |
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显色剂 A 液 |
Chromogen Solution A |
1 瓶 6 ml/3ml * |
2-8℃ |
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显色剂 B 液 |
Chromogen Solution B |
1 瓶 6 ml/3ml * |
2-8℃ |
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终止液 |
Stop Solution |
1 瓶 6 ml/3ml * |
2-8℃ |
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浓缩洗涤液 |
wash solution |
1 瓶20ml * |
2-8℃ |
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说明书 |
Instruction |
1份 * |
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封板膜 |
Closure plate membrane |
2 片 * |
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密封袋 |
Sealed bags |
1个 * |
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特异性： 本试剂盒可同时检测天然或重组的，且与其他相关蛋白无交叉反应。
预期应用： ELISA 量测定血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中的含量。
说明
1 ．试剂盒保存： -20 ℃ （较长时间不用时）； 2-8 ℃ （频繁使用时）。
2 ．浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。
3 ．中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。
4 ．刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。
实验原理
用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗该指标抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗该指标抗体、 HRP 标记的亲和素，经过洗涤后用底物 TMB 显色。 TMB 在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的该指标呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（ OD 值），计算样品浓度。
需要而未提供的试剂和器材
1.标准规格酶标仪
2.高速离心机
3.电热恒温培养箱
4.干净的试管和 Eppendof 管
5.系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，好用多通道移液器
6.蒸馏水，容量瓶等
标本的采集及保存
1.血清：全血标本请于室温放置 2 小时或 4 ℃ 过一晚后于 1000 x g 离心 20 分钟，取上清即可检测，或将标本放于 -20 ℃ 或 -80 ℃ 保存，但应避免反复冻融。
2.血浆：可用 EDTA 或肝素作为抗凝剂，标本采集后 30 分钟内于 2 - 8 ° C 1000 x g 离心 15 分钟，或将标本放于 -20 ℃ 或 -80 ℃ 保存，但应避免反复冻融。
3.细胞培养物上清或其它生物标本： 1000 x g 离心 20 分钟，取上清即可检测，或将标本放于 -20 ℃ 或 -80 ℃ 保存，但应避免反复冻融。
注：标本溶血会影响后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。
标本的稀释原则：
首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量，确定适当的稀释倍数。只有稀释至标准曲线的范围内，检测的结果才是准确的。稀释的过程中，应做好详细的记录。后计算浓度时，稀释了 “ N ” 倍，标本的浓度应再乘以 “ N ” 。
标准品的稀释原则： 2 瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至 1ml ，盖好后静置 10 分钟以上，然后反复颠倒 / 搓动以助溶解，其浓度为 300 pg/ml ，做系列倍比稀释后，分别稀释 300 pg/ml ， 150 pg/ml ， 75 pg/ml ， 37.5 pg/ml ， 18.5 pg/ml ， 9 pg/ml ， 4.5 pg/ml ，样品稀释液直接作为标准浓度 0 pg/ml ，临用前 15 分钟内配制。
如配制 150 pg/ml 标准品：取 0.5ml （不要少于 0.5ml ） 300 pg/ml 的上述标准品加入含 0.5ml 样品稀释液的 Eppendorf 管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
生物素标记抗体的稀释原则：
临用前以生物素标记抗体稀释液稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的量配制（每孔 100 μ l ），实际配制时应多配制 0.1-0.2ml 。如 10 μ l 生物素标记抗体加 990 μ l 生物素标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。
辣根过氧化物酶标记亲和素的稀释原则：
临用前以辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的量配制（每孔 100 μ l ），实际配制时应多配制 0.1-0.2ml 。如 10 μ l 辣根过氧化物酶标记亲和素加 990 μ l 辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。
操作步骤
实验开始前，请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时，用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围。
1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液 100 μ l ，余孔分别加标准品或待测样品 100 μ l ，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜， 37 ℃ 反应 120 分钟。
为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。
2.弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加生物素标记抗体工作液 100 μ l （取 1 μ l 生物素标记抗体加 99 μ l 生物素标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制）， 37 ℃ ,60 分钟。
3.温育 60 分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板 3 次，每次浸泡 1-2 分钟， 350 μ l/ 每孔，甩干。
4.每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液（同生物素标记抗体工作液） 100 μ l ， 37 ℃ ， 60 分钟。
5.温育 60 分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板 5 次，每次浸泡 1-2 分钟， 350 μ l/ 每孔，甩干。
6.依序每孔加底物溶液 90 μ l ， 37 ℃ 避光显色 （ 30 分钟内，此时肉眼可见标准品的前 3-4 孔有明显的梯度蓝色，后 3-4 孔梯度不明显，即可终止）。
7.依序每孔加终止溶液 50 μ l ，终止反应（此时蓝色立转黄色）。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。
8.用酶联仪在 450nm 波长依序测量各孔的光密度（ OD 值）。 在加终止液后 15 分钟以内进行检测。
注 ：
1. 用户在初次使用试剂盒时，应将各种试剂管离心数分钟，以便试剂集中到管底。
2. 每次实验留一孔作为空白调零孔，该孔不加任何试剂，只是后加底物溶液及 2N H 2 SO4 。测量时先用此孔调 OD 值至零。
3. 为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜。
4. 未使用完的酶标板或者试剂，请于 2-8 ℃ 保存。标准品、生物素标记抗体工作液、辣根过氧化物酶标记亲和素工作液请依据所需的量配置使用。请勿重复使用已稀释过的标准品、生物素标记抗体工作液或、辣根过氧化物酶标记亲和素工作液。
5. 建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。
洗板方法
手工洗板方法：吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将的洗涤缓冲液至少 0.3ml 注入孔内，浸泡 1-2分钟。根据需要，重复此过程数次。
自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。
计算
以标准物的浓度为横坐标（对数坐标）， OD 值为纵坐标（普通坐标），在半对数坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的 OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与 OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
注意事项
1. 当混合蛋白溶液时应尽量轻缓，避免起泡。
2. 洗涤过程非常重要，不充分的洗涤易造成假阳性。
3. 一次加样时间好控制在 5 分钟内，如标本数量多，使用排枪加样。
4. 请每次测定的同时做标准曲线，好做复孔。
5. 如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请后乘以稀释倍数。
6. 在配制标准品、检测溶液工作液时，请以相应的稀释液配制，不能混淆。
7. 底物请避光保存。
8. 不要用其它生产厂家的试剂替换试剂盒中的试剂。
