高效液相色谱仪的系统组成、工作原理:namespace prefix = o ns = "urn:schemas-microsoft-com:office:office" />
高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。储液器中的流动相被高压泵打入系统样品溶液经进样器进入流动相被流动相载入色谱柱(固定相) 内 由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数 在两相中作相对运动时 经过反复多次的吸附- 解吸的分配过程 各组分在移动速度上产生较大的差别 被分离成单个组分依次从柱内流出 通过检测器时 样品浓度被转换成电信号传送到记录仪数据以图谱形式打印出来。
2 高效液相色谱仪的应用
高效液相色谱法只要求样品能制成溶液 不受样品挥发性的限制流动相可选择的范围宽固定相的种类繁多因而可以分离热不稳定和非挥发性的、离解的和非离解的以及各种分子量范围的物质。
与试样预处理技术相配合HPL C 所达到的高分辨率和高灵敏度 使分离和同时测定性质上十分相近的物质成为可能能够分离复杂相体中的微量成分。随着固定相的发展 有可能在充分保持生化物质活性的条件下完成其分离。
HPL C 成为解决生化分析问题有前途的方法。由于HPL C具有高分辨率、高灵敏度、速度快、色谱柱可反复利用 流出组分易收集等优点因而被广泛应用到生物化学、食品分析、医药研究、环境分析、无机分析等各种领域。高效液相色谱仪与结构仪器的联用是一个重要的发展方向。
液相色谱- 质谱连用技术受到普遍重视 如分析氨基甲酸酯农药和多核芳烃等; 液相色谱- 红外光谱连用也发展很快如在环境污染分析测定水中的烃类 海水中的不挥发烃类 使环境污染分析得到新的发展。
3 高效液相色谱仪常见故障处理
L C - 10A T 高效液相色谱仪是日本岛津公司1996 年的产品 检测器为可变波长紫外检测器 色谱柱为岛津公司的ODS - C18 大连依利特的ODS -C18 。
八年的日常工作中遇到了几种故障如故障1 经咨询岛津公司的工程师后得以解决;故障2、故障5 是频繁碰到的问题等特作结如下:
故障1 流动相内有气泡 关闭泵 打开泄压阀 打开p urge键 清洗脱气 气泡不断从过滤器冒出 进入流动相 无论打开p urge 键几次都无法清除不断产生的气泡。
原因过滤器长期沉浸于乙酸铵等缓冲液内 过滤器内部由于霉菌的生长繁殖形成菌团阻塞了过滤器缓冲液难以流畅地通过过滤器空气在泵的压力作用下经过滤器进入流动相。
处理过滤器浸泡于5 %硝酸溶液中超声清洗几分钟即可;亦可将过滤器浸泡于5 %硝酸溶液中12～36 小时 轻轻震荡几次 再将过滤器用纯水清洗几次 打开泄压阀 打开p urge 键清洗脱气 如仍有气泡不断从过滤器冒出 继续将过滤器浸泡于5 %硝酸溶液中如没有气泡不断从过滤器中冒出说明过滤器内部的霉菌菌团已被硝酸破坏 流动相可以流畅地通过过滤器。打开泄压阀打开泵流速调至1. 0～3. 0ml/ min 纯水冲洗过滤器1 小时左右。即可将过滤器清洗干净。关闭泄压阀纯甲醇冲洗半小时即可。
故障2 柱压高原因(1) 缓冲液盐分如(乙酸铵等) 沉积于柱内; (2) 样品污染沉积。
处理对于种情况先用40～50 ℃的纯水低速正向冲洗柱子 待柱压逐渐下降后 相应提高流速冲洗 柱压大幅度下降后 用常温纯水冲洗 之后用纯甲醇冲洗柱子30 分钟; 对于第二种情况由样品的沉积引起污染的C18柱和纯水反向冲洗柱子 然后换成甲醇冲洗 接着用甲醇+ 异丙醇(4 + 6) 冲洗柱子(冲洗时间的长短由样品污染的情况而定) 再用换成甲醇冲洗 然后用纯水冲洗 后甲醇冲洗正向冲洗柱子30 分钟以上。
故障3 既无压力指示又无液体流过[1 >。
原因(1) 泵密封垫圈磨损; (2) 大量气泡进入泵体。
处理对于种情况更换密封垫圈;对于第二种情况在泵作用的同时 用一个50ml 的玻璃针筒在泵的出口处帮助抽出空气。
故障4 压力波动大流量不稳定.
原因系统中有空气或者单向阀的宝石球和阀座之间夹有异物使得两者不能密封。
处理工作中注意观察流动相的量 保证不锈钢滤器沉入储液器瓶底避免吸入空气流动相要充分脱气[2 >。如为单向阀和阀座之间夹有异物 拆下单向阀 放入盛有丙酮的烧杯用超声波清洗.
故障5 出峰不佳峰分叉。
原因(1) 色谱柱被污染; (2) 柱头填料塌陷。
处理对于种情况 先用纯水反向冲洗柱子 然后换成甲醇冲洗 接着用甲醇+ 异丙醇(4 + 6) 冲洗柱子(冲洗时间的长短由样品污染的情况而定) 再换成甲醇冲洗 然后用纯水冲洗后甲醇冲洗正向冲洗柱子30 分钟以上。如冲洗后依然出峰不佳则考虑第二种情况。对于第二种情况拧开柱头检查柱填料是否硬结或塌陷。去除硬结部分(污染的填料) 装入新填料 滴一滴甲醇 填料下陷 再填 用与柱内径相同的顶端平滑的不锈钢杆压紧 再填平 滴甲醇 再压紧反复几次 直至装满填平[2 >。柱头用甲醇冲洗干净 擦净柱外壁的填料 拧紧柱头用纯甲醇冲洗30 分钟以上。
故障6 峰面积重复性不佳。
原因(1) 进样阀漏液; (2) 加样针不到位。
处理对于种情况更换进样阀垫圈; 对于第二种情况保证加样针插到底注射样品溶液后须快速、平稳地从LOAD 状态转换到INJ EC T 状态以保证进样量的准确。日常工作中 液相色谱仪的保养非常重要 如要注意不要让空气进入输液系统和高压泵中 储液器内的溶液如长时间未用应清洗储液器并更换溶液 每次用完色谱仪后缓冲液要用纯水冲洗干净防止无机盐析出或沉积; 样品的前处理也很重要任何样品都要尽可能地去除杂质 完全溶解 尽量减少对色谱柱的污染 以延长色谱柱的使用寿命 同时避免注射过浓的样品溶液 以免残留液在进样阀内析出固体引起堵塞; 色谱柱作好标记用于不同分析目的的色谱柱不要混用等。
