血液中乙醇含量顶空气相色谱法测定
目的 建立检测血液中乙醇含量简便、准确的方法。方法 以叔丁醇作为内标，用顶空气相色谱火焰离子化检测器对样品进行检测，与平行操作的乙醇标准品比较，用内标法以乙醇对内标物的峰面积比进行定量。结果 色谱图上目标峰与内标峰分离完全，在0.01～10.0 g/L范围内标准工作曲线线性关系良好。结论 顶空气相色谱法测定血液中乙醇含量快速灵敏，能准确定量。该方法可用于实际检测分析。
关键词： 血液乙醇含量测定 气相色谱仪 顶空进样器
血液中乙醇浓度的高低是判定一个人清醒程度的重要指标。目前国内大多采用国标法测定即重铬酸钾氧化硫酸亚铁铵滴定法。该法花费时间长条件不易控制。由于血液中含有各种蛋白质和胶状物质，比较黏稠因此不能采用直接气相色谱法测定。本实验采用顶空气相色谱法，通过对待检血样进行适当处理和色谱条件的摸索，从而对实验方法有所改进。
1 材料和方法
1.1 主要仪器GC508型气相色谱仪，AHS-610型半自动顶空进样器，N2000色谱工作站。
1.2 试剂 空白抗凝血，无水乙醇(色谱纯)，叔丁醇（色谱纯，内标物）。
1.3 试剂配置
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1.3.2 乙醇标准工作液、叔丁醇标准工作液 分别吸取一定量的乙醇标准储备液和叔丁醇标准储备液，用蒸馏水稀释10倍，分别得浓度为1 g/L的乙醇标准工作液和叔丁醇标准工作液
1.4 色谱条件和顶空条件 色谱柱 毛细管色谱柱，柱温80℃，检测室温度220℃，进样温度200℃. 顶空样品温度80℃，阀体温度90℃，样品管路温度90℃。
1.5 样品制备 吸取2份待测全血0.5 ml，分别加入样品瓶中加100 μl(1 g/L)叔丁醇标准工作液作为内标，用密封钳加封铝帽，密封好瓶塞混匀，放入DK-300顶空进样器加热位里面。
另取空白全血2份，根据待测血液中乙醇含量的（目测乙醇峰面积的大小），添加相应的乙醇标准工作液（20 μg～2 mg），内标液按上述方法平行操作，作为已知对照。
1.6 样品检测 按下顶空进样按键，仪器自动负压吸取样品进气相色谱分析，同时顶空进样器给色谱工作一个采样信号，色谱工作站开始记录色谱数据。每个试样进样2次。
1.7 标准曲线的制作 将10 g/L的乙醇标准储备液用重蒸水分别稀释10、100、1000倍，得浓度分别为1、0.1、0.01 g/L的乙醇标准液，然后分别取0.05、0.1、0.2、0.4 ml的1 g/L乙醇标准液，0.1、0.2 ml的0.1 g/L乙醇标准液，0.1、0.2 ml的0.01 g/L乙醇标准液，同时加入0.2 ml的1 g/L叔丁醇标准工作液做内标，检测后制作标准工作曲线。见表1。
1.8 记录与计算 记录检材及已知对照中乙醇及内标峰面积值，填入GC定量分析记录表中，并计算出各检材中乙醇及内标的平均峰面积。表1 标准工作曲线相关数据 乙醇添加量理论计算的乙醇浓度根据表1的数据，计算标准曲线的回归方程及相关系数：
y=1.4062x+0.0268，r＝0.999
计算检材中醇含量W(g/100 ml)
W=f×检材中的醇峰面积平均值×内标添加量（μg）×100检材中内标峰面积平均值×检材量×1000
f=空白检材中醇添加量×内标峰面积平均值空白检材中内标添加量×醇峰面积平均值
计算相对相差（用来检验平行操作的稳定性及数据的可靠性）：
相对相差（%）=｜W1-W2｜W×100
式中W1、W2为2份检材平行定量测定的结果，W为2份检材平均值。
2 结 果
2.1 测定的色谱图 见图1、2。
该条件下目标峰与内标分离完全，（3.39±0.5）min处为乙醇目标峰，（10.0±0.5）min处为内标峰。
2.2 线性关系 在确定的佳试验条件下对不同浓度的乙醇标准工作液进行测定其回归方程为y=1.4062x＋0.0268r=0.999。在乙醇浓度为0.01～10.0 g/L范围内，血液中乙醇含量与相应的峰面积值呈良好的线性关系，测定限为0.01 g/L。
如有需要测定血液中乙醇含量可联系
北京北分三谱仪器有限责任公司
联系人：张经理理
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