英文名称：EpiTect Bisulfite Kit (48)
中文名称：亚硫酸氢盐转化试剂盒 (48)
品 牌：QIAGEN
货 号：59104
亚硫酸氢盐的完全转化和DNA回收，用于甲基化分析
简化的流程，获得快速、可靠的结果
胞嘧啶完全转化
的DNA保护体系，用于高度敏感的分析
优化的试验方案可处理FFPE组织样本DNA
离心柱和高通量96孔板方式
EpiTect Bisulfite Kit可在6小时内将DNA 序列中非甲基化的胞嘧啶完全转化为尿嘧啶。EpiTect 96 Bisulfite操作时间少于7小时。高灵敏度的方法采用全新的保护机制防止DNA降解，确保即使是1 ng的DNA也可获得灵敏的结果，转化率可高达99%。得益于的DNA保护技术，EpiTect Bisulfite转化后DNA高度适用于EpiTect Whole Bisulfitome Kits转化后全基因组扩增。因此可在转化后DNA量较少的情况下确保可靠的扩增。EpiTect Bisulfite Kits包括离心柱或96孔板形式的扩增和脱磺酸基过程，确保快速可靠的实验结果用于下游应用。两个试剂盒都可用于离心机或真空装置，另外，EpiTect Bisulfite Kit可在QIAcube全自动核酸纯化仪上全自动运行。
特点 | 参数 |
| 应用 | Multiplex PCR, real-time PCR, sequencing |
| 转化效率 | 99.4–99.8% |
| 洗脱体积 | Varies |
| 规格 | Spin column and 96-well plate |
| 处理 | Manual (spin and vacuum) |
| 样本量 | 1–2 µg |
| 样本类型 | Blood, (FFPE) tissue, DNA samples |
| 每次运行或制备时间 | <6 hours (1-48 samples), ~ 7 hours (48-96 samples) |
| 产量 | Depends on input amount of purified genomic DNA used for conversion |
性能
完整的EpiTect离心和真空过程只需6小时，包括从DNA到待分析的亚硫酸氢盐转化后的高纯DNA。EpiTect 96 Bisulfite操作时间少于7小时。传统的亚硫酸氢盐转化过程需要18个小时，且需要大量的操作(参见快速简单的亚硫酸氢盐转化和Time saving procedure)。EpiTect Bisulfite Kit为进行亚硫酸氢盐转化和DNA回收提供所需的全部试剂。
| EpiTect流程 | 传统流程 | |
|---|---|---|
| 反应构建 | 10分钟；预制溶液 | 40分钟；需反应构建 |
| 亚硫酸氢盐转化 | 5小时 | 16小时 |
| 纯化 | 30–45分钟； EpiTect离心柱或孔板 | 120分钟；纯化、脱璜、沉淀和洗涤 |
每个EpiTect Bisulfite Kit可以相同的效率转化低至1 ng到2 µg DNA。全新的实验步骤和优化的缓冲液可回收得到高产量的转化DNA。当通过real-time PCR扩增经转化的DNA时，低CT值的实验结果显示了高效的胞嘧啶转化(参见Complete cytosine conversion)。对转化的DNA的分析显示，EpiTect Bisulfite Kit可转化过99%的非甲基化的胞嘧啶(参见Highly efficient cytosine conversion)。高转化率确保了高重复性和可靠的下游分析结果。
原理
从珍稀样本和少量样本（如：福尔马林固定、FFPE石蜡包埋或显微切割组织）中确定甲基化模式，由于DNA的量很少，实验尤其困难。但是这些样本类型是鉴定有价值的疾病，预测生物标记物的专门研究对象。 EpiTect Bisulfite Kit 为这些类型的样本提供优化的操作流程，从而解决了难题（参见Methylation detection from FFPE tissue samples）。该试剂盒含有实验所需的全部缓冲液和试剂，只需少量的手动操作。
对于从FFPE样本、细胞、血液及组织中直接进行亚硫酸氢盐转化而无需预先分离DNA，我们使用EpiTect Plus FFPE Bisulfite Kit和EpiTect Plus LyseAll Bisulfite Kit。
DNA保护缓冲液采用的配方，防止DNA过度降解（在高温、低pH值条件下使用亚硫酸氢盐处理DNA时经常出现严重的DNA降解），并实现有效的DNA变性，从而产生完全转化为胞嘧啶时所需的单链DNA（参见Unique DNA Protect Buffer and pH indicator system）。防止DNA降解的发生可以保证后续大PCR片段的扩增和分析（参见Fast and easy bisulfite conversion）。DNA保护缓冲液含有PH指示剂染料，从而可保证用于胞嘧啶转化的正确的pH条件。有效的完整DNA回收可保证转化后的DNA至少保存12个月而不影响DNA的质量（参见Long-term DNA storage）。
操作流程
EpiTect Bisulfite操作流程基于QIAGEN简单直接的结合、洗涤和洗脱体系，仅需几个简单的步骤（参见Conversion procedure）。DNA经过热变性和亚硫酸氢盐转化后，被上样到EpiTect离心柱或96孔板上，使用优化的缓冲液和标准化的离心步骤或真空装置，洗去所有的亚硫酸氢钠并洗脱DNA。洗脱的DNA可用于各种下游应用，如：甲基特异性PCR、real-time PCR分析、亚硫酸氢盐转化后测序（bisulfite sequencing）、结合亚硫酸氢盐的限制性内切酶法分析（COBRA）和焦磷酸测序（Pyrosequencing）。
表观遗传学信息对于生物医学研究（尤其是肿瘤学）、干细胞研究以及发育生物学等领域都非常重要。但是分析DNA甲基化的变化目前仍具有挑战性，因为缺乏标准化的方法可从有限的样本中得到可重现性的数据。QIAGEN推出新的表观遗传学解决方案，使样本分析前处理到分析整个过程实现标准化，即从DNA样本收集、稳定和纯化，到亚硫酸氢盐转化和real-time或终点式PCR甲基化分析或测序（参见Standardized workflows in epigenetics）。
应用
经EpiTect Bisulfite Kit转化和纯化的DNA适用于多种下游应用，如：
甲基化特异性PCR 、real-time PCR
结合亚硫酸氢盐的限制性内切酶法分析（COBRA）
测序/焦磷酸测序（Pyrosequencing）/NGS
高分辨率熔解
甲基化芯片
