酶标仪测定的原理是在特定波长下，检测被测物的吸光值。 光是电磁波，波长100nm～400nm称为紫外光， 400nm～780nm之间的光可被人眼观察到，大子780nm称为红外光。人们只所以能够看到色彩，是因为光照射到物体上被物体反射回来。绿色植物之所以是绿色，是因为植物吸收了光中的红色光谱。
检测单位：
光通过被检测物，前后的能量差异即是被检测物吸收掉的能量，特定波长下，同一种被检测物的浓度与被吸收的能量成定量关系。
检测单位用OD值表示， OD是optical delnsity（光密度）的缩写，表示被检测物吸收掉的光密度， OD＝1og（1／trans），其中trans为检测物的透光值。根据Bouger-amberT-beer法则，OD值与光强度成下述关系：
E＝OD=logΙ0/Ι其中E表示被吸收的光密度， Ι0 为在检测物之前的光强度，Ι为从被检测物出来的光强度。
OD值由下述公式计算：
E＝OD=C×D×E
C为检测物的浓度
D为检测物的厚度
E为摩尔因子
在特定波长下测定每一种物质都有其特定的波长，在此波长下，此物质能够吸收多的光能量。如果选择其它的波长段，就会造成检测结果的不准确。因此，在测定检测物时，我们选择特定的波长进行检测，称为测量波
长。
另外因为每一种物质对光能量还存在一定的非特异性吸收，为了消除这种非特异性吸收，我们再选取一个参照波长，以消除这个不准确性。在参照波长下，检测物光的吸收小。检测波长和参照波长的吸光值之差可以消除非特异性吸收。
