超声波破碎大肠杆菌细胞实验

发布时间:2018-01-25
超声波破碎大肠杆菌细胞
超声波破碎大肠杆菌细胞原理
使用超声波细胞粉碎机设备,让大肠杆菌之类的微生物的细胞在超声波的作用下使细胞结构遭到破坏,这样就出现了细胞破碎的情况。
破碎大肠杆菌的试剂和材料
显微镜、超声波细胞破碎仪、烧杯、细胞悬浮液(取50-100mg)大肠杆菌湿细胞悬浮在1ml细胞破碎缓冲液中)、细胞破碎的缓冲液(10mmol/L,PH7.4Tris-HCL缓冲液中含5mmol/L的MgCL2)、培养基(牛肉膏0.5%、蛋白胨1%,NaCL0.5%制成肉汤液体培养基)。取上述肉汤培养基加进2%琼脂,制成固体培养基,用作菌种活化与保藏)。
破碎大肠杆菌的操作步骤
1、细胞培养和收集,将活化菌种接入肉汤培养基中,于37℃振荡培养。当到达对数生长期后(约6h),用离心机收集细胞,8000r/min离心5min,或3000r/min离心20min。
2、使用显微镜设备来观察大肠杆菌的形态和特征。
3、细胞破碎,取湿细胞50-100mg悬浮于1ml细胞破碎缓冲液中。用20kHz频率,150W的功率,在冰浴中进行超声波破碎,每破碎60s,间隔60s,反复破碎三次。
4、使用显微镜来观察破碎后的大肠杆菌细胞的形态。
超声波破碎大肠杆菌细胞的实验技巧
破碎大肠杆菌用于提取表达外源蛋白,在使用超声波破碎仪之前,用含有1%triton-X-100的PBS悬浮,然后再破碎效果较好,1%triton-X-100的作用还是很明显的,对其他的一些细菌同样起作用,比如链霉菌。
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