一 金黄色葡萄球菌的流行病学
金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在,空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可找到。作为人和动物的常见病原菌,其主要存在于人和动物的鼻腔、咽喉、头发上,50%以上健康人的皮肤上都有金黄色葡萄球菌存在。因而,食品受其污染的机会很多。
近年来,美国疾病控制中心报告,由金黄色葡萄球菌引起的感染占第二位,仅次于大肠杆菌。
金黄色葡萄球菌的流行病学一般有如下特点:
季节分布,多见于春夏季;中毒食品种类多,如奶、肉、蛋、鱼及其制品。此外,剩饭、油煎蛋、糯米糕及凉粉等引起的中毒事件也有报道。上呼吸道感染患者鼻腔带菌率83%,所以人畜化脓性感染部位常成为污染源。
一般说,金黄色葡萄球菌可通过以下途径污染食品:
食品加工人员、炊事员或销售人员带菌,造成食品污染;食品在加工前本身带菌,或在加工过程中受到了污染,产生了肠毒素,引起食物中毒;熟食制品包装不严,运输过程受到污染;奶牛患化脓性乳腺炎或禽畜局部化脓时,对肉体其他部位的污染。
金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生问题,在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒占整个细菌性食物中毒的33%,加拿大则更多,占45%,我国每年发生的此类中毒事件也非常多。肠毒素形成条件:
存放温度,在37°C内,温度越高,产毒时间越短;
存放地点,通风不良氧分压低易形成肠毒素;
食物种类,含蛋白质丰富,水分多,同时含一定量淀粉的食物,肠毒素易生成。
二 金黄色葡萄球菌的生物学特性
1、形态与染色:(staphylococcus aureus)
典型的金黄色葡萄球菌为球型,直径0.8μm左右,显微镜下排列成葡萄串状。
金黄色葡萄球菌无芽胞、鞭毛,大多数无荚膜。
革兰氏染色阳性。
2、培养特性:
金黄色葡萄球菌营养要求不高,在普通培养基上生长良好,需氧或兼性厌氧,适生长温度37°C,适生长pH 7.4。
平板上菌落厚、有光泽、圆形凸起,直径1-2mm。血平板菌落周围形成透明的溶血环。
金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性,可在10-15%NaCl肉汤中生长。
3、生化特性:
可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖,产酸不产气。甲基红反应阳性,VP反应弱阳性。
许多菌株可分解精氨酸,水解尿素,还原硝酸盐,液化明胶。
金黄色葡萄球菌具有较强的抵抗力,对磺胺类药物敏感性低,但对青霉素、红霉素等高度敏感。
三 金黄色葡萄球菌的检验
我们以SN标准中的近似值(MPN)测定法来进行讲解:
这种方法适用于检测认为带有大量竞争菌的食品及其原料和未经处理的食品中的少量金黄色 葡萄球菌。
1、样品制备:
固体或半固体食品: 以无菌操作称取25g样品放入装有225mL灭菌生理盐水的灭菌均 质杯内于8000r/min均质1~2min制成1:10样品匀液。
液体食品: 用灭菌吸管吸取25mL样品放入装有225mL灭菌生理盐水的灭菌玻璃瓶内 (瓶内预置适当数量的玻璃珠)经充分振摇制成1:10样品匀液。
供计数检验时可按十进位递增稀释法将样品匀液再进行适当稀释。
2、选三个连续稀释度,从每个稀释度分别取1 mL稀释样品液,接种3管含10%氯化钠why? 还记得么? 金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性,可在10-15%NaCl肉汤中生长。 因此,这事实上是一种选择性的增菌。胰蛋白胨大豆肉汤。样品的高稀释度必须达到能获得阴性终点置36±1℃培养48 h。
3、用3 mm接种环从有细菌生长的各管中移取1 环划线接种于表面干燥的Baird- Parker琼脂平板置36±1℃培养45~48h。
4、从有细菌生长的每一平板上至少挑取1个可疑金黄色葡萄球菌菌落移种到肉汤培养基中置36±1℃培养20~24 h。
5、取肉汤培养物0.3mL同0.5mL凝固酶试验兔血浆于8mm×100mm试管内充分混合置 36±1℃培养定时观察是否有凝块形成至少观察6 h以内容物完全凝固使试管倒置或 倾斜时不流动者为阳性。试验中需同时做巳知阳性和阴性对照。对可疑结果应进行革兰氏染色、镜检和其他辅助试验 加以证实。
6、报告结果:根据凝固酶试验结果查近似值(MPN)表报告金黄色葡萄球菌 的MPN/g (mL)。