Veriti热循环仪由Applied Biosystems推出,是真正意义上的温度梯度PCR仪。它采用VeriFlex™反应模块,使用6块独立的半导体加热模块,越温度梯度功能,真正做到优化PCR,控制每个模块设置的温度。斯坦福大学的博士后Hugo Hilton近日谈了使用Veriti热循环仪的体会。
同时,彩色触摸屏提供了功能强大的用户界面,简化了Veriti热循环仪的设置和使用。快速或标准PCR方法中的可选设置可提供灵活性,缩短PCR循环时间。
斯坦福大学的博士后Hugo Hilton近日谈了使用Veriti热循环仪的体会。他们实验室研究的是先天免疫系统的多样性如何影响免疫系统的功能。具体来说,他们研究NK细胞受体的多样性如何改变NK细胞功能。这种受体被称为杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)。它是表达于NK细胞和部分T细胞表面的一系列免疫球蛋白样家族分子,可识别MHC-I类分子并与之结合,传导激活或抑制性信号,从而调节NK细胞和部分T细胞活性。
近,他们设计了一个无细胞实验,使用重组的可溶KIR蛋白与96个HLA I类分子结合。他们将目的基因克隆到杆状病毒载体上,利用Veriti热循环仪在目的基因中引入一个或多个突变。通过定点突变,他们产生了重组KIR蛋白库,代表了人免疫系统中的多样性。
Hilton用PCR级别的水将DNA稀释至50 ng/ul,取1 ul添加到反应预混液中:5 ul 10x PCR缓冲液,1 ul 正向引物(10 uM)、1 ul 反向引物(10 uM)、1 ul dNTP混合物(4 uM)和1 ul Turbo聚合酶。他们的循环条件如下:95°C 30秒,18个循环的(95°C 30秒,55°C 60秒,68°C 15分钟)。
据Hilton介绍,在使用Veriti热循环仪时,他们相应延长了延伸时间,因为仪器的快速升降温会降低突变的效率。质粒长约9 kb,插入片段为1 kb,但他们的延伸时间达15分钟,过建议的1分钟/kb。他认为,这样能提高定点突变的效率。
Hilton认为,这款仪器的特点在于能够利用直观的触摸屏轻松编程。与老款热循环仪不同,这一过程很直观,容易操作,但仪器的启动时间似乎要比传统仪器长不少。之前使用的PCR步骤也能轻松保存,通过主启动菜单可轻松访问。
的来说,Veriti热循环仪为所有PCR反应提供了可轻松编程和用户友好的界面。触摸屏显示很直观,让用户对反应过程一目了然。