哺乳动物细胞培养已经成为科研领域的基础，细胞培养的质量直接决定着实验的成败。本文收集了一些细胞培养的实用技巧和心得，希望能够帮你实现的哺乳动物细胞培养。
培养基和添加物的选择
培养基的选择取决于细胞的类型和实验的目的，可以说培养基没有“好”只有“适”。如果是维持贴壁培养的哺乳动物细胞，一般选择普通的DMEM培养基（Dulbecco&s Modified Eagle Medium）。对于非贴壁细胞而言，专门的悬浮培养基更好用。
在选择合适培养基的时候，我们需要先了解细胞系的来源。这样的信息可以从细胞的供应商获取，也可以在文献上查到。此外，欧洲细胞株/微生物保藏中心（ECACC）也为各种细胞系了适培养基。有些特殊的细胞系，需要用特殊培养基进行培养，例如专门生产蛋白的杂交瘤细胞。“培养基的分工越来越细，人们甚至可以根据特定细胞或蛋白表达的需要来订制培养基，”Finley说，其所在的Sigma-Aldrich是ECACC的经销商。
对于不那么特殊的细胞，人们往往采用普通培养基（如DMEM），并辅之以支持细胞生长的因子。例如，许多研究人员会在基础DMEM中添加胎牛血清FBS。“血清能够提供多种营养物质和粘附因子，”Sigma-Aldrich的市场部经理George Sitterley说。不同细胞对血清的需求量并不相同，因此可以事先对细胞进行测试。“我们建议从10%FBS开始，然后根据细胞活力进行增减，”Rockland Immunochemicals的技术带头人Tabitha Eckert说，该公司以生产抗体为主。“我们倾向于选择含高糖和L-谷氨酰胺的培养基，不同DMEM中这些成分并不相同。”葡萄糖和谷氨酰胺是细胞的能源，不同类型的细胞对这些物质的喜好程度也存在差异。“谷氨酰胺往往很重要，我们可以用含谷氨酰胺和不含谷氨酰胺的培养基进行调配，得到合适的浓度。”Sitterley说。
有时人们会在细胞培养体系中添加抗生素以避免细菌污染，不过认为此举应当谨慎。“有些细胞培养认为没有必要使用抗生素，”Sitterley说。“不过，对于我们一般人来说，在短期应用中添加一定量的抗生素是可行的。但好不要长期使用抗生素，因为一旦细菌产生抗性反而更加麻烦。我们不得不使用更多抗生素，而这会影响细胞的生长甚至杀死细胞。”
培养容器的选择
细胞培养容器一般包括培养板、培养皿和培养瓶，我们可以根据研究方法和细胞量进行选择。单纯对细胞进行扩增可以采用细胞培养瓶。而多孔板可以让我们在培养细胞的同时，对细胞进行光学分析。在用细胞进行药物筛选时，一般需要使用高密度的微孔板。
为了优化抗体产量，Rockland Immunochemicals公司的研究者们很重视细胞培养容器的体积。他们先在培养瓶中培养细胞，然后根据抗体产量选择合适的容器进行扩大培养。“不要认为容器的体积越大，产量就会越大，”Eckert说。“有时小瓶与大瓶的效果一样好。我们采用的培养瓶一般是TC处理过的，且带有通气盖，这样可以促进细胞贴壁和CO2气体交换。”的确，不同类型的培养瓶具有不同的特点。例如，滚瓶适合大量悬浮细胞生长，能够促进气体交换。“也可以用不透气的滚瓶进行培养，这样细胞自己在其中产生CO2，”Eckert说。“能够培养过三十天。”
Corning公司的应用经理Mark Rothenberg指出，细胞系的生长特性也不容忽视。在选择培养容器时，应考虑到所需的细胞量、细胞的倍增时间（doubling time）和细胞的理想密度。“可以采用T25cm2到T225cm2的容器，制定成比例放大的细胞培养计划，”Rothenberg说。此外，市面上也涌现出了一批新产品可供选择，例如Corning®的多层培养瓶或HYPERFlasks®。Sigma-Aldrich也正准备发布细胞培养系列，包括TC处理过的培养瓶、移液管、锥形管和冷冻管等。
如果需要对大量细胞进行长期培养，大型的细胞培养系统或生物反应器就很有帮助，它们可以帮你控制多种参数，例如自动控制培养基更换、补料速率和氧气/ CO2水平。“如果需要长期生产大量抗体，我建议使用细胞培养系统，”Eckert说。“我们现在使用的是Wheaton的CELLine™生物反应器，它可以放入标准培养箱，和培养瓶一样好用。这一系统的优势在于，不需要特殊培养箱，长期使用比其他系统更能节省培养时间。”
