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原子吸收光谱仪（CAAM-2001系列）、金属套玻璃高效雾化器（WNA-系列）、氢化物发生器（WHG:namespace prefix = st1 ns = "urn:schemas-microsoft-com:office:smarttags" />
氢化物发生原子吸收法测定血液头发中痕量硒
在硒的生物化学作用被逐渐认识的要求提供的分析数据.由于经典的荧光光度法测定硒条件比较苛刻本文采用氢化物发生原子吸收法测定了人体、全血头发样品中硒的含量。在确定了仪器的佳工作条件的基础上着重研究了测定全血头发样品中硒的前处理方法及干扰试验.本法相对标准偏差小于0.5%标准加入回收率在95.7~102%之间适用于开展流行病学调查和临床分析的研究.
实验部分
一 仪器及工作条件
原子吸收光谱仪
氢化物发生器（WHG
金属套玻璃高效雾化器（WNA-1型）
硒空心阴极灯
电热石英管
波长196.0nm灯电流5mA狭缝1.3nm空气流量
二 试剂
硒(IV)标准贮备液:1000ug·ml-1由高纯硒粉配置.硒中间标准溶液5ug·ml-1.
硼氢化钾:1.5%溶液中含有0.1%的氢氧化钠用时现配.
亚沸蒸馏水
三 试样处理
准确取0.20ml血液试样或
于试样处理的同时制备试剂空白.
四 校准曲线的绘制
校准曲线
用微量定量取样器吸取硒中间表准溶液0103050和70ul分别放入50ml量瓶中用HCl(30%)溶液稀释到刻度获得浓度分别为01.03.05.0和7.0ng·ml 硒的标准系列溶液.
标准加入法曲线
移取10ml试样+10mlHCl(30%):10ml样液+10ml 2ng·ml-1硒标准溶液; 10ml样液+10ml 10ng·ml-1硒标准溶液; 10ml样液+10ml 14ng·ml-1硒标准溶液制成均含HCL(30%)溶液的硒标准加入法系列溶液.
结果与讨论
一 式样前处理方法的考察
试样的前处理是至关重要的.目前测定硒的前处理方法普遍采用湿法消化常用的分解装置有高型烧杯三角锥瓶高压分解坩锅和配有回流冷凝器的凯氏烧杯.由于前两种装置分解式样时使用的酸量较大硒易挥发损失而且这些方法得消化液均需要转移定容易引起较大的误差.本法采用刻度石英试管HNO3+HclO4+H2O2+HCl氧化还原体系于160oC恒温沙浴中消化血液头发试样.由于石英试管上端能起到空气的冷凝回流作用因而试剂不易挥发试样消化完全.与配有冷凝管的烧瓶消化法比较具有操作简单试剂和式样用量少减少转译的误差等优点.本法与水冷凝管的凯氏烧瓶消化法比较的结果见表1.
表1 分解方法的比较
统计参数* | 本法 | 水冷凝管烧瓶法 | ||
全血 (ng·ml-1 ) | 头发 (ng·g-1 ) | 全血 (ng·ml-1 ) | 头发 (ng·g-1 ) | |
X+SD | 144.5+6.9 | 66.5+13.0 | 145.0+7.1 | 664.8+14.4 |
N | 50 | 50 | 50 | 50 |
RSD% | 4.8 | 2.0 | 4.9 | 2.2 |
* X: 硒的平均值 n: 测定次数 SD: 标准偏差 RSD:相对标准偏差
二 常见共存例子的干扰试验
我们调查了存在于血液头发中的25种共存例子对痕量硒测定的干扰试验结果表明下述离子(ug·ml-1)不干扰5ng·ml-1硒的测定:Ca(700) Na 、Fe3+(500) Mg、K(200) Cu、Zn(5)Ni、Mn、Al(1) Cr6+、Co(0.2) Mo、As3+、Bi、Sr、Ti、Hg、Sn2+ (0.1)Si、Ba(0.5)Pb(0.06)Cd(0.05)以及NO3-、ClO4-、H2O2(
锑(Ⅲ)0.05 ug·ml-1不干扰含量≥0.1 ug·ml-1有负干扰但血液头发中锑的含量一般都低于此值再者经过了相对的稀释它不会给本法测定硒带来影响.当HNO3、HClO4、H2O2的浓度小于
时也不干扰测定.原因是盐酸介质保持了较佳浓度可是试样中的Fe、Cu和Ni等重金属元素形成络合物避免其干扰(1) 这些与文献(3) 报道是一致的.另外还采用低浓度硒的校准曲线使试样中基体元素的浓度得到相对稀释(100倍以上)因而更有效地消除血液头发试样中基体元素对测定硒的干扰.
三 校准曲线法与标准加入法结果比较
在拟定的佳条件下 准曲线法和标准加入法(图1)对试样进行了测试.实验表明尽管血液头发试样中含有较复杂的基体元素但用上述两种校准曲线所求得硒的含量是一只的.
从图1可以看出三种校准曲线的斜率基本相同回归分析后相对系数均在0.9998以内.这也证明 血液头发中的基体元素对硒的测定均无影响.
四 本法的回收率及精密度
在血液头发试样中分别添加硒标准按试样处理步骤处理后进行测定其回收结果见表2.五个平行样品的测定方法的精密度在1.2~4.8%以内.
经过分析商业部食品检测科学研究所提供的一级标准物质(GBW08551)猪肝中的硒含量标准值为0.94+0.05 ug·g-1 本法测定值为0.93+0.04 ug·g-1 准确度是令人满意的.
表 2 硒的回收率
样品 | 原含Se量(ppb) | 加入Se量(ppb) | 测得Se量(ppb) | 回收率(%) |
空白 | - | 100 | 100 | 100 |
血液A | 4 | 2 | ||
血液B | 246.0 | 200 300 | 442.8 544.9 | 98.4 99.6 |
头发C | 356.6 | 100 200 | 457.5 548.0 | 101 95.7 |
头发D | 665.1 | 200 300 | 864.6 95902 | 99.8 98.0 |
五 应用
用本法测定人体全血(177例)头发(327例)中硒的含量其结果与文献报道值相近(4~11) .结果见表3.
表 3 人体全血头发硒平均水平
样品 | 分析例数 | 范围(ppb) | 平均值(ppb) | 文献值(ppb) |
血液 | 73.6 | 170(4) 125(5) (8) | ||
头发 | 327 | 226.3~1590.0 | 722.0 | 670(8) 740(10) 930(11) |
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