首先我们看一下transwell的概念,trans-这个词根有转移、转运、穿过等意思,well有小室的意思,可以从字面上理解,这是一类有通透性的杯状的装置,根据Corning公司的Transwell说明书中的介绍,可以认为这是一种膜滤器(Membrane filters),也可认为是一种有通透性的支架(permeable supports)。更准确地说,Transwell应该是一种实验技术,这项技术的主要材料是Transwell小室(Transwell chamber,Transwell insert),其外形为一个可放置在孔板里的小杯子,不同厂家对Transwell会有不同的命名,而不同型号也可有不同形状,不同大小,根据实验需要,可有不同选择。但无论是何种外形,其关键部分都是一致的,那就是杯子底层的一张有通透性的膜,而杯子其余部分的材料与普通的孔板是一样。这层膜带有微孔,孔径大小有0.1-12.0μm,根据不同需要可用不同材料,一般常用的是聚碳酸酯膜(polycarbonate membrane)。
.>将.>Transwell.>小室放入培养板中,小室内称上室,培养板内称下室,上室内盛装上层培养液,下室内盛装下层培养液,上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。
.>我们将细胞种在上室内,由于聚碳酸酯膜有通透性,下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞,从而可以研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。
.>应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜,就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。
这里主要谈几种大家常用的实验:
.>(1)..>共培养体系:
.>小于.>3.0um.>孔径条件下,细胞不会迁徙通过,因此,若研究不涉及细胞运动能力,不需要细胞穿过聚碳酸酯膜,则应选择.>3.0μm.>以下孔径。常用.>0.4.>、.>3.0μm.>。我们实验室用的是.>0.4μm.>。
.>将细胞.>A.>种于上室,细胞.>B.>种于下室,可以研究细胞.>B.>分泌或代谢产生的物质对细胞.>A.>的影响。
.>(2)..>趋化性实验
.>可用.>5.0.>、.>8.0.>、.>12.0μm.>膜,上室细胞可穿过聚碳酸酯膜进入下室,计数进入下室的细胞量可反映下室成分对上室细胞的趋化能力。
.>①.>细胞.>B.>对细胞.>A.>的趋化作用:将细胞.>A.>种于上室,细胞.>B.>种于下室,可以研究细胞.>B.>分泌或代谢产生的物质对细胞.>A.>的趋化作用。
.>②.>趋化因子对细胞的趋化作用:将细胞种于上室,下室加入某种趋化因子,可研究该趋化因子对细胞的趋化作用。
.>(3)..>肿瘤细胞迁移实验
.>常用.>8.0.>、.>12.0μm.>膜,上室种肿瘤细胞,下室加入.>FBS.>或某些特定的趋化因子,肿瘤细胞会向营养成分高的下室跑,计数进入下室的细胞量可反映肿瘤细胞的迁移能力。
.>(4)..>肿瘤细胞侵袭实验
.>常用.>8.0.>、.>12.0μm.>膜,原理与肿瘤细胞迁移实验类似。
.>上室种肿瘤细胞,下室加入.>FBS.>或某些特定的趋化因子,肿瘤细胞会向营养成分高的下室跑,但与肿瘤细胞迁移实验不同的是,聚碳酸酯膜上室侧铺上一层基质胶,用以模仿体内细胞外基质,细胞欲进入下室,先要分泌基质金属蛋白酶(.>MMPs.>)将基质胶降解,方可通过聚碳酸酯膜。计数进入下室的细胞量可反映肿瘤细胞的侵袭能力。
这个小室常用的是有.>Costar.>-.>Corning.>、.>BD.>、.>Chemicon、.>Boyden chamber.>、.>Millipore.>等等,.>这些厂家提供的小室,有的已铺好基质胶,买来就可以用,很方便,但也比较贵。.>而Coster.>-.>Corning.>公司生产的小室,是大家常用的,但要自己铺胶。.>coster.>的.>24.>孔板(货号3422)的.>transwell.>的价格是.>300.>元左右(.>RMB)(上海玉博生物报价)8μm.>,24室,用于肿瘤的侵袭实验。.>Transwell.>小室按照厂家的要求,都是一次性使用,不过有人认为洗洗泡泡还是可以重复用的,大家可以试试。
常用的是人工重构基底膜材料Matrigel,主要成分为层黏连蛋白和Ⅳ型胶原,生产厂家有BD、美国Collaborative Rsearch公司等。Matrigel是BD公司生产的,是一种细胞外基质,4度时是液体,在37度会逐渐凝固成胶状,不可逆。同样的东西在sigma叫ECM。