恒远结:猪肝中瘦肉精试剂盒检测前处理流程

发布时间:2012-04-18

恒远结:猪肝中瘦肉精试剂盒检测前处理流程

1、粉碎样品,取5 g至锥型瓶内,加25 ml 50mmol/L Hcl<配置方法:4.4-4.5 ml 36%-38%盐酸定容至1000 ml>, 摇床振荡1.5 h均质 。——此时样品在2-8  可稳定3天。

2、称取6 g均质物加入离心瓶中,10-15  4000 rpm或更高转速 离心 15min

3、转移上清液到另一个离心瓶中, 加300  1 mol/L NaOH<配置方法:110.0 g  NaOH +100mlCO2水,室温从上述饱和溶液中取54 ml上清液,去 CO2水定容至500 ml  >,混合15 min

4、加入4 ml 500mmol/L KH2PO4缓冲液 ( pH=3.0) <配置方法:30.02 gKH2PO4去离子水定容至500 ml,1 mol/L H3PO4约20滴调节 pH值,用 pH计测量 >  简单混合(轻摇),4   1.5h以上或过夜 。——此时样品在2-8  可稳定2天,使用前离心。

5、10-15  4000 rpm或更高转速离心15 min, 分离全部上清液 (清亮为准),升温至20-24  ,准备 RIDAC18  柱纯化。

6、以下至第  步需 严格控制室温 (20-24  ),3 ml  甲醇()洗柱,流速1 d/s<在固相萃取仪内操作, 压力控制 约在   -10KPa >

7、 2ml 50 mmol/L  KH2PO4缓冲液 ( pH=3.0) <配置方法: 50 ml  500mmol/L KH2PO4缓冲液去离子水定容至500 ml  1mol/L H3PO4  约10滴调节 pH值,用 pH计测量 >  0.25d/s 洗柱

8、样品(全部上清液)0.25 d/s进柱

9、2 ml 50 mmol/L  KH2PO4缓冲液( pH=3.0)0.25 d/s洗柱

10、1 ml 甲醇()洗柱,流速 0.25d/s洗脱样品

11、氮吹仪50-60  完全蒸发溶剂。

12、1  ml去离子水溶解干燥残留物,振荡2 min,转移至指形管内备用(分析用20  )。

以下进行试剂盒酶联免疫吸附实验操作,省略

阳性添加 :6g均质时添加300 ul 8100 ppt,后定容1ml 相当于稀释8100*0.3

回收计算  实测结果  

           8100*0.3

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