恒远结:猪肝中瘦肉精试剂盒检测前处理流程
1、粉碎样品,取5 g至锥型瓶内,加25 ml 50mmol/L Hcl<配置方法:4.4-4.5 ml 36%-38%盐酸定容至1000 ml>, 摇床振荡1.5 h均质 。——此时样品在2-8 可稳定3天。
2、称取6 g均质物加入离心瓶中,10-15 4000 rpm或更高转速 离心 15min。
3、转移上清液到另一个离心瓶中, 加300 1 mol/L NaOH<配置方法:110.0 g NaOH +100ml去 CO2水,室温从上述饱和溶液中取54 ml上清液,去 CO2水定容至500 ml >,混合15 min。
4、加入4 ml 500mmol/L KH2PO4缓冲液 ( pH=3.0) <配置方法:30.02 gKH2PO4去离子水定容至500 ml,1 mol/L H3PO4约20滴调节 pH值,用 pH计测量 > 简单混合(轻摇),4 1.5h以上或过夜 。——此时样品在2-8 可稳定2天,使用前离心。
5、10-15 4000 rpm或更高转速离心15 min, 分离全部上清液 (清亮为准),升温至20-24 ,准备 RIDAC18 柱纯化。
6、以下至第 步需 严格控制室温 (20-24 ),3 ml 甲醇()洗柱,流速1 d/s, <在固相萃取仪内操作, 压力控制 约在 -10KPa >。
7、 2ml 50 mmol/L KH2PO4缓冲液 ( pH=3.0) <配置方法: 50 ml 500mmol/L KH2PO4缓冲液去离子水定容至500 ml 1mol/L H3PO4 约10滴调节 pH值,用 pH计测量 > 0.25d/s 洗柱 。
8、样品(全部上清液)0.25 d/s进柱 。
9、2 ml 50 mmol/L KH2PO4缓冲液( pH=3.0)0.25 d/s洗柱 。
10、1 ml 甲醇()洗柱,流速 0.25d/s洗脱样品 。
11、氮吹仪50-60 完全蒸发溶剂。
12、1 ml去离子水溶解干燥残留物,振荡2 min,转移至指形管内备用(分析用20 )。
以下进行试剂盒酶联免疫吸附实验操作,省略。
阳性添加 :6g均质时添加300 ul 8100 ppt,后定容1ml 相当于稀释8100*0.3
回收计算 : 实测结果
8100*0.3
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