一、基本原理
光线是高速运动的光子流，也是具有波长和频率特征的电磁波。光子的能量与频率成正比，与波长成反比。肉眼可见的光线称为可见光。可见光只占电磁波谱的很窄部分(400nm到760nm)。不同波长的可见光具有不同的颜色。波长大于760nm的光线称为红外线。波长小于400nm的光线称为紫外线。
当一束白光通过一杯有颜色的溶液时，具有一定波长的光线，选择性的被溶液所吸收。不同物质由于其分子结构不同，对不同波长光线的吸收能力不同，因此每种物质都具有其特异的吸收光谱。吸收光谱的测定可以用来鉴定各种不同的物质。
例如核黄素之所以呈现黄色，是由于它仅吸收可见光中的蓝光范围，并测得其吸收峰在450nm（图2-1）。在紫外光范围它还有两个吸收峰。它们分别是260nm和370nm。
(核黄素22mmol/L溶于0.1mol/L 磷酸钠中，pH7.06，吸收杯厚1cm)
分光光度法常被用来测定溶液中存在的光吸收物质的浓度。其理论依据是郎伯—比尔(Lambert-Beer)定律。
（一）郎伯定律(Lambert’s Law)
一束单色光在通过一溶液时，由于溶液吸收一部分光能，使光的强度减弱。若溶液的浓度不变，则溶液的厚度愈大，光强度的减弱也愈显著(图2-2)
分光光度法[Spectrophotometry]
若I0表示入射光强度，I表示光线通过溶液后的强度，L表示溶液的厚度。
