? :lang="EN-US">:lang="EN-US">:lang="EN-US">大鼠白细胞介素2（IL-2:lang="EN-US">:lang="EN-US">）:lang="EN-US">:lang="EN-US">酶联免疫分析
试剂盒使用说明书
实验原理：
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中:lang="EN-US">:lang="EN-US">:lang="EN-US">大鼠白细胞介素2:lang="EN-US">:lang="EN-US">（IL-2:lang="EN-US">:lang="EN-US">）水平。用纯化的大鼠白细胞介素:lang="EN-US">2抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入白细胞介素:lang="EN-US">2，再与:lang="EN-US">HRP标记的羊抗鼠抗体结合，形成抗体:lang="EN-US">-抗原:lang="EN-US">-酶标抗体复合物，经过洗涤后加底物:lang="EN-US">TMB显色。:lang="EN-US">TMB在:lang="EN-US">HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的:lang="EN-US">IL-2呈正相关。用酶标仪在:lang="EN-US">450nm波长下测定吸光度（:lang="EN-US">OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠白细胞介素:lang="EN-US">2（:lang="EN-US">IL-2）浓度。
试剂盒组成
| 试剂盒组成 | :lang="EN-US">48孔配置 | :lang="EN-US">96孔配置 | 保存 |
| 说明书 | :lang="EN-US">1份 | :lang="EN-US">1份 |
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| 封板膜 | |||
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| :lang="EN-US">2片（:lang="EN-US">48） | :lang="EN-US">2片（:lang="EN-US">96） |
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| 密封袋 | |||
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| :lang="EN-US">1个 | :lang="EN-US">1个 |
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| 酶标包被板 | |||
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| :lang="EN-US">1×:lang="EN-US">48 | :lang="EN-US">1×:lang="EN-US">96 | :lang="EN-US">2:lang="EN-US">-8:lang="EN-US">:lang="EN-US">℃:lang="EN-US">保存 |
| 标准品：:lang="EN-US">1800ng/L | :lang="EN-US">0.5ml×:lang="EN-US">1瓶 | :lang="EN-US">0.5ml×:lang="EN-US">1瓶 | :lang="EN-US">2:lang="EN-US">-8:lang="EN-US">:lang="EN-US">℃:lang="EN-US">保存 |
| 标准品稀释液 | :lang="EN-US">1.5ml×:lang="EN-US">1瓶 | :lang="EN-US">1.5ml×:lang="EN-US">1瓶 | :lang="EN-US">2:lang="EN-US">-8:lang="EN-US">:lang="EN-US">℃:lang="EN-US">保存 |
| 酶标试剂 | :lang="EN-US">3ml×:lang="EN-US">1瓶 | :lang="EN-US">6ml×:lang="EN-US">1瓶 | :lang="EN-US">2:lang="EN-US">-8:lang="EN-US">:lang="EN-US">℃:lang="EN-US">保存 |
| 样品稀释液 | :lang="EN-US">3ml×:lang="EN-US">1瓶 | :lang="EN-US">6ml×:lang="EN-US">1瓶 | :lang="EN-US">2:lang="EN-US">-8:lang="EN-US">:lang="EN-US">℃:lang="EN-US">保存 |
| 显色剂:lang="EN-US">A液 | :lang="EN-US">3ml×:lang="EN-US">1瓶 | :lang="EN-US">6ml×:lang="EN-US">1瓶 | :lang="EN-US">2:lang="EN-US">-8:lang="EN-US">:lang="EN-US">℃:lang="EN-US">保存 |
| 显色剂:lang="EN-US">B液 | :lang="EN-US">3ml×:lang="EN-US">1瓶 | :lang="EN-US">6ml×:lang="EN-US">1瓶 | :lang="EN-US">2:lang="EN-US">-8:lang="EN-US">:lang="EN-US">℃:lang="EN-US">保存 |
| 终止液 | :lang="EN-US">3ml×:lang="EN-US">1瓶 | :lang="EN-US">6ml×:lang="EN-US">1瓶 | :lang="EN-US">2:lang="EN-US">-8:lang="EN-US">:lang="EN-US">℃:lang="EN-US">保存 |
| 浓缩洗涤液 | （:lang="EN-US">20ml×:lang="EN-US">20倍）×:lang="EN-US">1瓶 | （:lang="EN-US">20ml×:lang="EN-US">30倍）×:lang="EN-US">1瓶 | :lang="EN-US">2 |
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| :lang="EN-US">-8:lang="EN-US">:lang="EN-US">℃:lang="EN-US">保存 |
样本处理及要求：
:lang="EN-US">1. 血清：室温血液自然凝固:lang="EN-US">10-20分钟，离心:lang="EN-US">20分钟左右（:lang="EN-US">2000-3000转:lang="EN-US">/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
:lang="EN-US">2. 血浆：应根据标本的要求选择:lang="EN-US">EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合:lang="EN-US">10-20分钟后，离心:lang="EN-US">20分钟左右（:lang="EN-US">2000-3000转:lang="EN-US">/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
:lang="EN-US">3. 尿液：用无菌管收集，离心:lang="EN-US">20分钟左右（:lang="EN-US">2000-3000转:lang="EN-US">/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
:lang="EN-US">4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心:lang="EN-US">20分钟左右（:lang="EN-US">2000-3000转:lang="EN-US">/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用:lang="EN-US">PBS（:lang="EN-US">PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到:lang="EN-US">100万:lang="EN-US">/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心:lang="EN-US">20分钟左右（:lang="EN-US">2000-3000转:lang="EN-US">/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
:lang="EN-US">5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的:lang="EN-US">PBS，:lang="EN-US">PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持:lang="EN-US">2
:lang="EN-US">-8:lang="EN-US">:lang="EN-US">℃:lang="EN-US">的温度。加入一定量的PBS（:lang="EN-US">PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心:lang="EN-US">20分钟左右（:lang="EN-US">2000-3000转:lang="EN-US">/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
:lang="EN-US">6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于:lang="EN-US">-20℃
保存，但应避免反复冻融:lang="EN-US">.
:lang="EN-US">7. 不能检测含NaN3的样品，因:lang="EN-US">NaN3抑制辣根过氧化物酶的（:lang="EN-US">HRP）活性。
操作步骤
:lang="EN-US">1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔:lang="EN-US">10孔，在、第二孔中分别加标准品:lang="EN-US">100μl，然后在、第二孔中加标准品稀释液:lang="EN-US">50μl，混匀；然后从孔、第二孔中各取:lang="EN-US">100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液:lang="EN-US">50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取:lang="EN-US">50μl弃掉，再各取:lang="EN-US">50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液:lang="EN-US">50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取:lang="EN-US">50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液:lang="EN-US">50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取:lang="EN-US">50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液:lang="EN-US">50μl，混匀后从第九第十孔中各取:lang="EN-US">50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为:lang="EN-US">50μl，浓度分别为:lang="EN-US">1200 ng/L，:lang="EN-US">800ng/L ，:lang="EN-US">400 ng/L，:lang="EN-US">200ng/L，:lang="EN-US">100ng/L）。
:lang="EN-US">2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液:lang="EN-US">40μl，然后再加待测样品:lang="EN-US">10μl（样品终稀释度为:lang="EN-US">5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
:lang="EN-US">3. 温育：用封板膜封板后置:lang="EN-US">37℃温育:lang="EN-US">30分钟。
:lang="EN-US">4. 配液：将:lang="EN-US">30（:lang="EN-US">48T的:lang="EN-US">20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水:lang="EN-US">30（:lang="EN-US">48T的:lang="EN-US">20倍）倍稀释后
:lang="EN-US">5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置:lang="EN-US">30秒后弃去，如此重复:lang="EN-US">5次，拍干。
:lang="EN-US">6. 加酶：每孔加入酶标试剂:lang="EN-US">50μl，空白孔除外。
:lang="EN-US">7. 温育：操作同:lang="EN-US">3。
:lang="EN-US">8. 洗涤：操作同:lang="EN-US">5。
:lang="EN-US">9. 显色：每孔先加入显色剂:lang="EN-US">A50μl，再加入显色剂:lang="EN-US">B50μl，轻轻震荡混匀，:lang="EN-US">37℃
避光显色:lang="EN-US">15分钟:lang="EN-US">.
:lang="EN-US">10. 终止：每孔加终止液:lang="EN-US">50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
:lang="EN-US">11. 测定：以空白空调零，:lang="EN-US">450nm波长依序测量各孔的吸光度（:lang="EN-US">OD值）。 测定应在加终止液后:lang="EN-US">15分钟以内进行。
注意事项：
:lang="EN-US">1． 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡:lang="EN-US">15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
:lang="EN-US">2． 浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
:lang="EN-US">3． 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间好控制在:lang="EN-US">5分钟内，如标本数量多，使用排枪加样。
:lang="EN-US">4． 请每次测定的同时做标准曲线，好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本:lang="EN-US">OD值大于标准品孔孔的:lang="EN-US">OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（:lang="EN-US">n倍）后再测定，计算时请后乘以稀释倍数（×:lang="EN-US">n×:lang="EN-US">5）。
:lang="EN-US">5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
:lang="EN-US">6． 底物请避光保存。
:lang="EN-US">7． 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准:lang="EN-US">.
:lang="EN-US">8． 所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
:lang="EN-US">9． 本试剂不同批号组分不得混用。
:lang="EN-US">10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
计算：
以标准物的浓度为横坐标，:lang="EN-US">OD值为纵坐标，
在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的:lang="EN-US">OD
值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释
倍数；或用标准物的浓度与:lang="EN-US">OD值计算出标
准曲线的直线回归方程式，将样品的:lang="EN-US">OD值
代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释
倍数，即为样品的实际浓度。
试剂盒性能：
:lang="EN-US">1.样品线性回归与预期浓度相关系数:lang="EN-US">R值为:lang="EN-US">0.990以上。
:lang="EN-US">2.批内与批见应分别小于:lang="EN-US">9%和:lang="EN-US">11%
检测范围：
:lang="EN-US">80:lang="EN-US">ng/L:lang="EN-US"> -1500:lang="EN-US">ng/L
保存条件及有效期：
:lang="EN-US">1.试剂盒保存：；:lang="EN-US">2:lang="EN-US">-8:lang="EN-US">:lang="EN-US">℃。
:lang="EN-US">2．有效期：:lang="EN-US">6个月
