胞浆蛋白提取试剂盒的应用！
一、背景
胞浆蛋白提取试剂盒用于哺乳动物组织和细胞中提取胞质蛋白，试剂盒中的裂解液含有蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂，作用较为温和，可获得蛋白，可用于免疫印迹实验等基础研究实验，由于含有上述的酶抑制剂，不能用于研究蛋白激酶和磷酸激酶的研究。
二、操作方法
1、组织蛋白的提取
在1ml的冷裂解液中各加入10ul的磷酸酶抑制剂、蛋白酶抑制剂和PMSF；混匀，放置在冰上备用；称取0.1g的新鲜组织，放置于玻璃匀浆器的入口缓冲处，用眼科剪将组织块尽可能的剪碎，然后加入0.5-1ml的新配置的裂解液，研磨直至没有明显的组织块，这个过程注意冰上操作；将组织匀浆液移入1.5ml的EP管中，4 oC 12000g离心30min；吸取上清至新的管中；进行蛋白定量或者变性进行蛋白实验。
2、细胞蛋白的提取
裂解液的用量：107个细胞需要裂解液1ml；
贴壁细胞：弃去培养基，用冷的PBS洗两次，弃去PBS，然后加入计算好的细胞裂解液；在冰上用细胞刮刀进行刮离细胞，将刮离的细胞裂解液移入EP管中，颠倒裂解20-30min。
悬浮细胞：4 oC 400g离心收集细胞，用冷的PBS洗两次细胞，同样按细胞数加入裂解液，涡旋10s，放置冰上裂解10min，重复3-4次；裂解完毕之后，将细胞裂解液4 oC 12000g离心30min；将上清移入新的EP管中；进行蛋白定量或者变性进行蛋白实验。
三、应用
用于肝细胞核蛋白及胞浆蛋白诱导建立的系统性红斑狼疮兔模型研究：
为了建立经济、稳定、简便、可重复性强,并能提供足量研究样本的系统性红斑狼疮兔模型,以便于今后进一步进行SLE发病机制和治,疗学的研究。
方法：选取1岁龄体重约2.5kg雌性新西兰白兔50只,随机分为5组,每组10只。提取同种异体肝脏细胞核蛋白及细胞浆蛋白,设首次注射时间为第0天,于第0天及第1、2、4、6、8、10、12周末予实验组兔蛋白提取物500μg/次(浓度为：1 mg/ml),其中,实验组1皮下注射肝细胞核蛋白,实验组2皮下注射肝细胞浆蛋白,实验组3经静脉注射肝细胞浆蛋白；相同时间点予对照组1皮下注射等体积PBS,予对照组2静脉注射等体积PBS。
实验组1、2及对照组1首次注射时将抗原制剂与完全弗氏佐剂等体积乳化。于第1周开始至第18周末,每两周于耳缘静脉采集各组兔血液,并以特制兔体液收集代谢笼收集各组兔24h尿。观测各组兔血Scr、BUN、TP、ALB、ALT、AST等生化指标及24h尿蛋白含量；用ELISA法测定各组兔血清ANA、抗dsDNA抗体及抗Sm抗体。并于第18周末处死所有实验动物。
皮肤组织经HE和免疫组化染色；肾脏组织行HE染色、Masson染色和免疫组化染色,并对肾脏和皮肤病变的严重程度及范围进行半定量分级。
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