小鼠胚胎瘤细胞的传代方法与培养步骤！
ATDC5细胞是来源于畸胎瘤细胞的小鼠软骨发生细胞系，在胰岛素刺激下，分化成软骨细胞，形成软骨小结，表达Ⅱ型胶原和X型胶原*发生矿化，反映软骨发生过程。
一、细胞简介
平台编号：bio-105955
拉丁属名：ATDC5（小鼠胚胎瘤细胞）
细胞名称：小鼠胚胎瘤细胞
规格：1ml/T25
种属：小鼠细胞系/胚胎、胎盘和脐带
到货周期：10-15个工作日
细胞用途：仅供科研使用。
注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的，不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用
二、细胞特性
1）来源：小鼠软骨
2）形态：多角形，贴壁生长
3）含量：>1x106 个/mL
4）污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装
三、ATDC5细胞传代方法
1、用75%酒精喷洒整个培养瓶消毒，将其平躺置于培养箱中进行1-3小时的缓冲，.然后置于无菌操作台，打开瓶口，将其中的培养液去掉，再往其中加入5-6mL新鲜培养基并置于细胞培养箱中培养，根据细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换液以及传代；
2、待细胞长满瓶底面积80%-90%，需要对其进行传代，*次传代比例为1:2；
3、传代步骤：将0.25%含EDTA胰酶置于37℃预热，倒掉培养瓶中的培养基，往培养瓶中加入3-5 ml PBS，轻晃洗涤后弃去。往瓶中加1-2 ml预热好的胰酶，置于37°孵育消化（*次消化需时常取出置于显微镜下观察，以显微镜下细胞触角回收变圆、轻拍瓶壁见细胞脱落为*消化时间，记录*消化时间，以便于下次消化），消化好后加入1ml完全培养基终止消化。用移液枪轻轻吹打瓶壁上的细胞，使之完全脱落，然后收集细胞悬液，1200rpm离心3min，弃上清，加入完全培养基重悬细胞，进行传代。
四、细胞培养步骤
1、培养基及培养冻存条件准备：
1）准备DMEM培养基(DMEM，GIBCO，货号11965-092)，90%；胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%完全培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
2、细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养*（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养*）。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2、加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3、按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4、将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
五、细胞的运输和保存
使用T25瓶充液发送活细胞。收到细胞后，请先在显微镜下检查细胞生长状态，并将T25瓶置于培养箱约6h或*后，再次检查细胞状态。若状态良好，可按照以下细胞培养步骤进行细胞后续处理操作。若发现可疑污染物，请及时与我们取得联系。
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