青海液相色谱仪提供苏丹红新检测方法
方法的优势：
· 创新的苏丹红萃取填料，有效去除食品中的天然色素和植物油等杂质干扰
· 回收率稳定、重现，克服了传统方法中氧化铝活性不稳定的缺陷
· 方法简单、快速、节省溶剂
· 优化的色谱分离条件，有效去除杂质干扰
1. 样品处理：
1.1 样品提取：（参考国标GB/T 19681—2005）
1.1.1辣椒粉等粉状样品
称取0.5 g（准确至0.001g）样品于三角瓶中，加入5mL正己烷，超声10min，5000 r/min离心5 min后取上清液3 mL，待净化。
1.1.2辣椒油等油状样品
称取0.5 g（准确至0.001g）样品于小烧杯中，加入3mL正己烷溶解，涡旋1分钟混匀，待净化。
1.1.3腊肠样品
将腊肠切成小丁，称取3.0 g, 放入10 mL离心管中，加入5 mL正己烷，超声10分钟，然后步骤同辣椒粉样品。
1.1.4番茄酱、甜辣酱样品
称取番茄酱1g，加入1 mL水，再加5 mL正己烷/丙酮（3/1，v/v），涡旋3分钟，超声10分钟，接着10000 r/min离心5分钟，取上层有机相3 mL，加无水硫酸钠0.5 g，涡旋0.5分钟，静置取上清液作为上样液。
1.2固相萃取柱净化：苏丹红柱(500mg/3mL)
（1）活化：在HiCapt Sudan柱中依次加入3mL丙酮，2 mL正己烷活化。
（2）萃取：将待净化液加入HiCapt Sudan柱中（在柱中正己烷液面为2mm时上样，此过程不要使柱干涸），再用200μL正己烷淋洗样品管，一并加入SPE柱中。流出液弃去。
（3）清洗：待上样液完全流出后，用2mL的3%异丙醇-正己烷溶液淋洗，淋洗液弃去，将小柱抽干。
（4）解吸：3mL丙酮解吸，收集解吸液。
（5）吹干及定容：解吸液50℃氮气吹干，加入1mL丙酮溶解并定容，用0.45μm有机滤膜过滤后HPLC分析。
2.色谱条件：
色谱柱： C18-T(150 mm×4.6 mm i.d., 5 μm)；
流动相：流动相A：0.3%甲酸的水溶液：乙腈=85:15，
流动相B：0.3%甲酸的乙腈溶液：丙酮=80:20；
流速：1mL/min
柱温：35℃
检测波长：520nm
进样量：10μL
梯度洗脱，梯度条件见下表：
|
时间/min |
流动相 |
曲线 |
|
|
A% |
B% |
||
|
0.01 |
30 |
70 |
线性 |
|
5 |
30 |
70 |
线性 |
|
40 |
0 |
100 |
线性 |
|
70 |
0 |
100 |
线性 |
|
72 |
30 |
70 |
线性 |
|
80 |
30 |
70 |
线性 |
注：40分钟后主要在冲洗柱子
3. 标准溶液液的配制
准确称取苏丹红I，Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ标准品各5 mg(按其标称含量折算)，用乙酸乙酯定容至10 mL，分别配成500 mg/L的标准储备液。取储备液各200 L于10 mL容量瓶中，用丙酮定容，得4种苏丹红的质量浓度均为10 mg/L的混合标准储备液。将该溶液放置于4℃冰箱中避光保存。
4 结果
4.1 标准曲线与检出限
将10 mg/L的苏丹红储备液用提取液逐级稀释配制了0.05 - 5 mg/L苏丹红标准溶液。按照选定的色谱条件测定，以峰面积对质量浓度进行线性回归。由表1可见，四种苏丹红在其质量浓度为0.05 - 5 mg/L 的范围内具有较好的线性关系，相关系数的平方均大于0.999；方法的检出限分别为21 - 41 ng/g（辣椒粉）；日内和日间相对标准偏差（RSD）分别小于8.9 %和8.7 %
表1线性回归方程、检测限LOD及定量限LOQ
|
组分 |
线性范围(mg/l) |
线性回归方程 |
检测限LOD(ng/g) |
定量限LOQ (ng/g) |
||
|
a |
b |
r2 |
||||
|
苏丹红I |
0.05-5 |
52712 |
1872 |
0.9995 |
41 |
137 |
|
苏丹红II |
0.05-5 |
70425 |
172 |
0.9994 |
37 |
123 |
|
苏丹红III |
0.05-5 |
113431 |
771 |
0.9990 |
25 |
82 |
|
苏丹红IV |
0.05-5 |
120906 |
2673 |
0.9992 |
21 |
70 |
4.2 回收率和精密度
分别加入低、中、高3种质量浓度的苏丹红标准溶液于辣椒粉样品中，然后按照本实验方法进行测定，回收率为80.70.14%-107.88%（见表2）。图5为添加苏丹红的辣椒粉样品的色谱图。从该图可以看出，没有杂质干扰。且该方法具有较好的日内及日间精密度（见表2）；日内和日间相对标准偏差（RSD）分别小于8.9 %和8.7 %。
表2.方法的回收率和日内、日间精密度
|
分析物 |
添加水平/(μg/g) |
回收率/% |
RSD % |
|
|
日内(n=5) |
日间(n=3) |
|||
|
苏丹红I |
0.2 |
99.84 |
8.9 |
8.7 |
|
1 |
90.88 |
2.2 |
1.0 |
|
|
3 |
91.32 |
5.2 |
2.3 |
|
|
苏丹红II |
0.2 |
102.83 |
6.4 |
4.6 |
|
1 |
107.88 |
4.2 |
3.6 |
|
|
3 |
102.54 |
4.3 |
3.6 |
|
|
苏丹红III |
0.2 |
81.18 |
3.8 |
4.1 |
|
1 |
86.42 |
1.3 |
1.7 |
|
|
3 |
84.71 |
2.6 |
2.4 |
|
|
苏丹红IV |
0.2 |
89.72 |
5.5 |
2.7 |
|
1 |
80.70 |
3.9 |
2.5 |
|
|
3 |
82.93 |
1.9 |
2.3 |
|
按本方法测定了咸鸭蛋、腊肠、辣椒油的回收率和相对标准偏差，其回收率81.56%-110.41%（见表3）。
表3 咸鸭蛋、腊肠、辣椒油中苏丹红的回收率
|
回收率(%) |
咸鸭蛋 |
腊肠 |
辣椒油 |
|
SudanI |
83.09 |
110.41 |
97.69 |
|
SudanII |
84.81 |
96.69 |
99.93 |
|
SudanIII |
101.86 |
103.96 |
100.71 |
|
SudanIV |
81.56 |
85.42 |
95.76 |
结果表明，本实验方法能够有效地去除食品中的基质干扰，具有简单、灵敏的特点，适用于食品中苏丹红的检测。
