本试剂盒采用双位点夹心酶联免疫吸附法ELISA，测定样品中猪免疫球蛋白M IgM的水平。向预先包被猪免疫球蛋白M IgM抗体的酶标孔中加入标准品、待测样本和HRP标记的免疫球蛋白MIgM抗体，经过温育和洗涤，去除未结合的组分，然后再加入底物A、B，产生蓝色，并在酸的作用下转化成总线终的黄色。颜色的深浅与样品中猪免疫球蛋白M IgM的浓度呈正相关。
洗板方法
手工洗板方法：甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将稀释后的洗涤液至少0.35ml注入孔内，浸泡1-2分钟。根据需要，重复此过程数次。
自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中
标本要求：
1．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的HRP活性。
2．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
操作程序：
1． 分别设空白孔 空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同、标准品孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品孔中加入标准品50μl；在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl，样品总线终稀释度为5倍。每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。轻轻晃动混匀，37℃温育60分钟。
2． 弃去液体，甩干，每孔加满稀释后洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。如此重复5次，拍干。
3． 每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
4． 取出酶标板，每孔加终止液50μl，终止反应，此时蓝色立转黄色。
5． 测定：以空白孔调零，在450nm波长下测量各孔的吸光度值。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
6． 根据标准品的浓度及对应的OD值计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样品的OD值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种应用软件来计算。应记住由于样品稀释了的，其实际浓度应该乘以稀释倍数。
