乙型流感病毒Yamagata荧光PCR法检测试剂盒

PCR实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  

特点：产品仅用于科研
◇高特异性：与其他病毒无交叉反应，无非特异性扩增；
◇高灵敏度：检测灵敏度可达10~100拷贝；
◇操作简便：该系列所有试剂均采用相同的体系和条件，可同时进行多个检测；
◇高通量：多种双重PCR检测以及三重PCR检测试剂盒。

参数规格：

产品名称	乙型流感病毒Yamagata荧光PCR法检测试剂盒
规格	50T
货号	FS-P63240

实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤 
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
      10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
       引物1（10pM）               2μl
       引物2（10PM）              2μl
       Taq酶（2U/μl）            1μl
 1 μl         DNA模板（50ng-1μg/μl）
      加ddH2O至               50 μl
    视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，总线后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。总线好设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用总线高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。

注意事项：
①加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
②使用干净的塑料容器配置洗涤液。
③按照鸡血红蛋白(HB)ELISA检测试剂盒说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
④底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。
⑤洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
⑥使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器 。
⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
⑧试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

小鼠诱导性多潜能干细胞;PUMC-mips-B4 I型胶原酶(含10mL酶解缓冲液) 1mL1,4,8,11-四氮杂环十四烷-1,4,8,11-四乙酸四乙酯(>97.0%(GC))质量规格：>97.0%(GC)Tetraethyl 1,4,8,11-Tetraazacyclotetradecane-1,4,8,11-tetraacetate

Raji，人Butt's瘤细胞 Human1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7-三乙酸三叔丁酯(>93.0%(N))质量规格：>93.0%(N)Tri-tert-butyl 1,4,7,10-Tetraazacyclododecane-1,4,7-triacetate

FAS Others Human 人 CD95 / Fas / TNFRSF6 人细胞裂解液 (阳性对照) 1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸三叔丁酯(>97.0%(T))质量规格：>97.0%(T)Tri-tert-butyl 1,4,7,10-Tetraazacyclododecane-1,4,7,10-tetraacetate

人胎盘绒膜癌细胞;BeWo4-叔丁基杯[8]芳烃(>98.0%(HPLC))质量规格：>98.0%(HPLC)4-tert-Butylcalix[8]arene

CLEC5A Others Cynomolgus 食蟹猴 CLEC5A / MDL1 / MDL-1 人细胞裂解液 (阳性对照) 1,4,5,6-四氢-5,6-二氧-2,3-吡嗪二甲腈(>98.0%(HPLC)(T))质量规格：>98.0%(HPLC)(T)1,4,5,6-Tetrahydro-5,6-dioxo-2,3-pyrazinedicarbonitrile
N-苄氧羰基-L-谷氨酰胺  Z-Gln-OH  质量规格：>98%,BR 人基质金属蛋白酶5(MMP-5)试剂盒 Human maix lloproteinase 5,MMP-5 ELISA Kit

N-CBZ-L-丙氨酸  CBZ-L-Gly  质量规格：>98%,BR 人基质金属蛋白酶7(MMP-7)试剂盒 Human Maix lloproteinase 7,MMP-7 ELISA kit

盐酸丙美卡因  Proparacaine HCl  质量规格：>98%,BR 人基质金属蛋白酶8/中性粒细胞胶原酶(MMP-8)试剂盒 Human Maix lloproteinase 8/Neuophil collagenase,MMP-8 ELISA kit

N-苄氧羰基-L-丝氨酸  Z-Ser-OH  质量规格：>98.5%,BR 人基质金属蛋白酶9/明胶酶B(MMP-9/Gelatinase B)试剂盒 Human maix lloproteinase 9/Gelatinase B,MMP-9 ELISA Kit

N-苄氧羰基-L-苏氨酸  Z-Thr-OH  质量规格：0.98 人基质金属蛋白酶抑制因子2(TIMP-2)试剂盒 Human TIMP-2 ELISA Kit

N-CBZ-beta-丙氨酸  Z-β-Ala-OH  质量规格：0.98 人基质金属蛋白酶抑制因子3(TIMP-3)试剂盒 Human TIMP-3 ELISA Kit

CBZ-D-谷氨酸α-苄酯  Z-Glu-OBzl  质量规格：>98% 人基质金属蛋白酶抑制因子4(TIMP-4)试剂盒 Human TIMP-4 ELISA Kit

N-苄氧羰基-L-酪氨酸  Z-Tyr-OH  质量规格：0.98 人基质金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP-1)试剂盒 Human TIMP-1 ELISA Kit

Z-L-酪氨酸甲酯  Z-Tyr-OMe  质量规格：>98%,BR 人基质裂解蛋白(MAT)ELISA检测试剂盒Humanmailysin,MATELISAKit 96T/48T

阿莫西林钠  Amoxicillin   质量规格：>90%,BR 人基质裂解蛋白/基质溶素(MAT)试剂盒 Human mailysin,MAT ELISA Kit
人基质金属蛋白酶25(MMP25)试剂盒 Human maix llopeptidase 25,MMP25 ELISA kit 6-氨基青霉烷酸  6-Aminopenicillanic acid  质量规格：>98%,BR

人基质金属蛋白酶3/基质裂解素1(MMP3/S1)试剂盒 Human maix lloproteinase 3/somelysin 1,MMP3/S1 ELISA kit L-天门冬酰胺酶,门冬酰胺酶  Asparaginase  质量规格：BR,>250IU/MG

人基质金属蛋白酶4(MMP-4)试剂盒 Human maix lloproteinase 4,MMP-4 ELISA Kit N-苄氧羰基-L-丙氨酸  N-Carbobenzyloxy-L-alanine  质量规格：>98%,BR

人基质金属蛋白酶5(MMP-5)试剂盒 Human maix lloproteinase 5,MMP-5 ELISA Kit N-苄氧羰基-L-谷氨酰胺  Z-Gln-OH  质量规格：>98%,BR

人基质金属蛋白酶7(MMP-7)试剂盒 Human Maix lloproteinase 7,MMP-7 ELISA kit N-CBZ-L-丙氨酸  CBZ-L-Gly  质量规格：>98%,BR

人基质金属蛋白酶8/中性粒细胞胶原酶(MMP-8)试剂盒 Human Maix lloproteinase 8/Neuophil collagenase,MMP-8 ELISA kit 盐酸丙美卡因  Proparacaine HCl  质量规格：>98%,BR

人基质金属蛋白酶9/明胶酶B(MMP-9/Gelatinase B)试剂盒 Human maix lloproteinase 9/Gelatinase B,MMP-9 ELISA Kit N-苄氧羰基-L-丝氨酸  Z-Ser-OH  质量规格：>98.5%,BR

人基质金属蛋白酶抑制因子2(TIMP-2)试剂盒 Human TIMP-2 ELISA Kit N-苄氧羰基-L-苏氨酸  Z-Thr-OH  质量规格：0.98

人基质金属蛋白酶抑制因子3(TIMP-3)试剂盒 Human TIMP-3 ELISA Kit N-CBZ-beta-丙氨酸  Z-β-Ala-OH  质量规格：0.98

人基质金属蛋白酶抑制因子4(TIMP-4)试剂盒 Human TIMP-4 ELISA Kit CBZ-D-谷氨酸α-苄酯  Z-Glu-OBzl  质量规格：>98%
定量PCR方法：
乙型流感病毒Yamagata荧光PCR法检测试剂盒a、竞争法
选择由突变克隆产生的含有一个新内切位点的外源竞争性模板。在同一反应管中，待测样品与竞争模板用同一对引物同时扩增（其中一个引物为荧光标记）。扩增后用内切酶消化PCR产物，竞争性模板的产物被酶解为两个片段，而待测模板不被酶切，可通过电泳或高效液相将两种产物分开，分别测定荧光强度，根据已知模板推测未知模板的起始拷贝数。
b、内参照法
在不同的PCR反应管中加入已定量的内标和引物，内标用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记，下游引物不标记。在模板扩增的同时，内标也被扩增。在PCR产物中，由于内标与靶模板的长度不同，二者的扩增产物可用电泳或高效液相分离开来，分别测定其荧光强度，以内标为对照定量待检测模板。
c、PCR－ELISA法
利用di高辛或生物素等标记引物，扩增产物被固相板上特异的探针所结合，再加入抗di高辛或生物素酶标抗体－辣根过氧化物酶结合物，*终酶使底物显色。常规的PCR－ELISA法只是定性实验，若加入内标，作出标准曲线，也可实现定量检测目的。