禽流感病毒H5N2亚型荧光PCR法检测试剂盒

PCR实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  

特点：产品仅用于科研
◇高特异性：与其他病毒无交叉反应，无非特异性扩增；
◇高灵敏度：检测灵敏度可达10~100拷贝；
◇操作简便：该系列所有试剂均采用相同的体系和条件，可同时进行多个检测；
◇高通量：多种双重PCR检测以及三重PCR检测试剂盒。

参数规格：

产品名称	禽流感病毒H5N2亚型荧光PCR法检测试剂盒
规格	50T
货号	FS-P63246

实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤 
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
      10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
       引物1（10pM）               2μl
       引物2（10PM）              2μl
       Taq酶（2U/μl）            1μl
 1 μl         DNA模板（50ng-1μg/μl）
      加ddH2O至               50 μl
    视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，总线后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。总线好设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用总线高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。

注意事项：
①加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
②使用干净的塑料容器配置洗涤液。
③按照鸡血红蛋白(HB)ELISA检测试剂盒说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
④底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。
⑤洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
⑥使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器 。
⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
⑧试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

小鼠条纹神经细胞(MN-s)(1×106)1,2,3,5-Tetra-O-acetyl-β-D-ribofuranose四乙酰核糖10毫升，98%

狗肾细胞;Super Tube杜邦制冷剂 1,1,1,2-Tqtrcfluoroqthcnq 811-97-

小鼠T瘤细胞(鸡OVA基因修饰);E.G7-OVA 小鼠胎儿成纤维细胞完全培养基 100mL炳二晴 99% Mclonic ccid 141-8-

CHO, 仓鼠卵巢细胞系 其它2-硝基本-α-D-半乳糖苷，英文名或英文缩写：ONPG，级别：共轭级,4500u/mg,小牛肠,芬末，规格：1克

TNFRSF9 Others Human 人 4-1BB / CD137 / TNFRSF9 人细胞裂解液 (阳性对照) 148-24-38-羟基;8-氢氧化;8-羟基氮(杂);邻羟基氮(杂)8-xy7noxyinoneoline;Oxyinoneoline;Oxine;inoneopxenol;8-inoneolinone;xy7noxybenzopyridine;Oxybenzopyridine;pxenopyridine;Oxy
N-羟乙酰神经氨酸  N-Glycolylneuraminic Acid  质量规格：美国进口 植物组织DNA损伤彗星荧光检测试剂盒20

N,N-二去甲基*美布汀-d5  N,N-Didesmethyl Trimebutine-d5   质量规格：美国进口 植物组织可溶性蛋白制备试剂盒20

N,N-二去甲基*美布汀  N,N-Didesmethyl Trimebutine   质量规格：美国进口 植物组织膜性囊泡(vacuole)分离试剂盒20

N-去甲基*美布汀  N-Demethyl Trimebutine   质量规格：美国进口 植物组织线粒体氧化物歧化酶(Mn/FeSOD)分离试剂盒50

柚皮素-4'-O-β-D-葡萄糖苷酸  Naringenin-4'-O-beta-D-Glucuronide  质量规格：美国进口 植物组织线粒体形态/活性荧光染色试剂盒20

(±)-柚皮素  (±)-Naringenin  质量规格：美国进口 植物组织质膜(plasmamembrane)分离试剂盒20

3-羟基环苯扎林  3-Hydroxy Cyclobenzaprine  质量规格：美国进口 质粒/蛋白制备样品内比色量检测试剂盒20

环苯扎林 N-β-D-葡萄糖苷酸  Cyclobenzaprine N-β-D-Glucuronide  质量规格：美国进口 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体3(AIL-R3)ELISA检测试剂盒Monkeytumornecrosisfactor-relatedapoptosis-inducingligand3,AIL-R3ELISAKit 96T/48T

去甲基盐酸环苯扎林  Desmethyl Cyclobenzaprine   质量规格：美国进口 猪Ⅲ型前胶原氨基端肽(PⅢ)ELISA检测试剂盒PorcineprocollagenⅢN-terminalpeptide,PⅢELISAKit 96T/48T

δ9(11)-甲基  Delta9(11)-Methyltestosterone  质量规格：美国进口 猪α干扰素(IFN-α)ELISA检测试剂盒PorcineIerferonα,IFN-αELISAKit 96T/48T
植物巯基含量比色量检测试剂盒20 雷米普利-d3   Ramipril-d3  质量规格：美国进口

植物糖蛋白树脂法化试剂盒5 雷米普利拉  Ramiprilat  质量规格：美国进口

植物吲哚-3-乙酸(IAA)荧光定量检测试剂盒(包括萃取)20 甲基4,7,8,9-四-O-乙酰-2-硫代-N-乙酰-a-D-神经氨酸甲酯  Methyl4,7,8,9-tetra-O-acetyl-2-thio-N-acetyl-a-D-neuraminic acidmethylester  质量规格：美国进口

植物组织DNA损伤彗星荧光检测试剂盒20 N-羟乙酰神经氨酸  N-Glycolylneuraminic Acid  质量规格：美国进口

植物组织可溶性蛋白制备试剂盒20 N,N-二去甲基*美布汀-d5  N,N-Didesmethyl Trimebutine-d5   质量规格：美国进口

植物组织膜性囊泡(vacuole)分离试剂盒20 N,N-二去甲基*美布汀  N,N-Didesmethyl Trimebutine   质量规格：美国进口

植物组织线粒体氧化物歧化酶(Mn/FeSOD)分离试剂盒50 N-去甲基*美布汀  N-Demethyl Trimebutine   质量规格：美国进口

植物组织线粒体形态/活性荧光染色试剂盒20 柚皮素-4'-O-β-D-葡萄糖苷酸  Naringenin-4'-O-beta-D-Glucuronide  质量规格：美国进口

植物组织质膜(plasmamembrane)分离试剂盒20 (±)-柚皮素  (±)-Naringenin  质量规格：美国进口

质粒/蛋白制备样品内比色量检测试剂盒20 3-羟基环苯扎林  3-Hydroxy Cyclobenzaprine  质量规格：美国进口
禽流感病毒H5N2亚型荧光PCR法检测试剂盒定量PCR方法：
a、竞争法
选择由突变克隆产生的含有一个新内切位点的外源竞争性模板。在同一反应管中，待测样品与竞争模板用同一对引物同时扩增（其中一个引物为荧光标记）。扩增后用内切酶消化PCR产物，竞争性模板的产物被酶解为两个片段，而待测模板不被酶切，可通过电泳或高效液相将两种产物分开，分别测定荧光强度，根据已知模板推测未知模板的起始拷贝数。
b、内参照法
在不同的PCR反应管中加入已定量的内标和引物，内标用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记，下游引物不标记。在模板扩增的同时，内标也被扩增。在PCR产物中，由于内标与靶模板的长度不同，二者的扩增产物可用电泳或高效液相分离开来，分别测定其荧光强度，以内标为对照定量待检测模板。
c、PCR－ELISA法
利用di高辛或生物素等标记引物，扩增产物被固相板上特异的探针所结合，再加入抗di高辛或生物素酶标抗体－辣根过氧化物酶结合物，*终酶使底物显色。常规的PCR－ELISA法只是定性实验，若加入内标，作出标准曲线，也可实现定量检测目的。