血清游离胆固醇 FC含量测定

发布时间:2021-08-06
生化法检测试剂盒:分光光度法、微量法、比色法、酶标法、高液相色谱法,研发,*技术研发团队,操作简便快捷,规格合理、系列成套,价格合理,是广大科研工作者的好选择,详细产品咨询:
产品名称:血清游离胆固醇 FC含量测定
检测方法:微量法
规格:0.2g或者0.2mL

样品制备:
1). 直接或稀释使用清亮无色中性液体样品,体积可达2.000ml。
2). 过滤混浊溶液。
3). 除去样品中的CO 2 (果糖含量测试盒说明书过过滤)。
4 ). 果糖含量测试盒说明书过加氢氧化钾或氢氧化钠将酸性样品的PH值调至8.0。
5 ). 调整酸性浅色样品的PH值至8.0,孵育约15分钟。
6 ). 用空白样品做对照测定有色样品(如有必要调整PH值至8.0)。
7 ). 用PVPP( 聚乙烯吡咯烷酮)或聚酰胺处理深色未经稀释或体积更大的样品。
8 ). 压碎、搅匀固体或半固体样品,用水溶解提取。
9 ). 用Carrez试剂将含有蛋白质的样品去蛋白。
10).含脂肪的样品用热水提取。
需自备的仪器和用品:
液相色谱仪、示差折光检测器、低速离心机、溶剂抽滤装置、超声波清洗器、针头式过滤器(水系,50个,0.22μm)、滤膜(水系1个,0.45μm)、钙柱(Carbomix Ca-NP10,7.8 ×300 mm)、可调式移液器、样品瓶(50个,2mL)、纯水。
血清游离胆固醇 FC含量测定

 通用规则:

1、洗液不够时,可用蒸馏水自行配制PH7.4,0.02M的磷酸缓冲液,加入0.1%的吐温20作为洗液。加入1/1000的叠氮钠后可长期保存。
2、液体全部加完后,可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动30秒,混匀液体。也可以用酶标仪的晃动功能。
3、底物有一定的毒性,终止液对皮肤有腐蚀性,应尽量避免接触。
4、检测前,要打开酶标仪,使之稳定10分钟以上。
5、吸取液体时,要用量程和需要量接近的枪去吸,减少误差。
6、将液体加到酶标孔中时,避免枪头和孔内液体接触,可使枪头上的液滴和孔壁接触,液滴会自然流下去。
7、温浴时,要用不干胶或胶带纸封好酶标板,防止水分的蒸发。
8、洗板时,每次洗液加入后,应静置1分钟,使清洗更加。没有洗板机时,倒去液体后,要将酶标板在报纸或毛纸上用力拍干。
9、用枪吸取液体时速度不能太快,以免产生气泡而使吸取量不准确。
10、底物是光敏感的,要在临用前现配。
实验结果判断我有妙招:
1、定量测定结果根据标准曲线计算样品中待测物的含量。
2、以样品孔的OD值大于阴性对照OD值+2~3SD,作为阳性结果的阈值。
3、以P/N值(阳性孔OD值/阴性孔OD值)大于或等于2.1为阳性,P/N值小于2.1,但大于1.5为可疑,P/N小于1.5为阴性。
4、ELISA试剂盒目测定性法:加入底物经酶解和终止反应后,肉眼观察阳性孔颜色明显深于(竞争法则浅于)阴性对照,与阴性对照的颜色接近者,判定为阴性。
与您分享常用不稳定试剂的分类及要求:
① 易挥发、低燃点的试剂要密封,放于阴凉、通风、远离火源处保存。
② 与水蒸气,水发生反应的物质要密封,并远离水源保存。
③ 易与氧气作用的试剂,应将其固体或晶体密封保存,不宜长期存放其水溶液,亚硫酸,氢硫酸溶液要密封存放,钾,钠,白磷更要采用液封形式。
④ 与二氧化碳反应的物质要密封保存,其相应的溶液较固体更易反应,所以更要注意密封保存。
⑤ 易挥发或自身分解的试剂要密封,放于阴凉通风处保存。

2

操作步骤(仅供参考):  
1.配制65mM H2O2基液:本试剂盒提供的H2O2基液中的H2O2浓度约为1M。由于过 氧化氢不是非常稳定,使用前需自行测定过氧化氢的实际浓度。把浓度约为1M的H2O2基液用本试剂盒提供的CAT Assay buffer稀释100倍,使H2O2基液中的H2O2浓度约为10mM。
2.准备样品:  
a,细胞或组织样品:取恰当细胞或组织进行裂解,可以采用Leagene Western及IP 细胞裂解液,如果有必要需进行适当匀浆,低速离心取上清,-70℃冻存,用于CAT的检测。  
b,血浆、血清和尿液样品:血浆、血清按照常规方法制备,用生理盐水10倍稀释后, 可以直接用于本试剂盒的测定,尿液通常也可以直接用于测定,-70℃冻存,用于CAT的检测。  
c,全血样品:收集适量的全血(whole blood)至一抗凝管内,颠倒混匀。取100μl全 血冻融一次,用CAT Assay buffer1000倍后进行CAT检测。
d,血液中的红细胞裂解液:用抗凝管收集血液,颠倒混匀。取至少500μl全血4℃ 3000g离心5min,弃上清,沉淀用预冷的生理盐水洗涤3次。  
e,高活性样品:如果样品中含有较高活性的CAT,可以使用CAT Assay buffer稀释。
f,(选做)样品准备完毕后可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度,以便于后续 计算单位蛋白重量组织或细胞内的CAT含量。  
3、 CAT检测:按照下表设置空白管、自身对照管、测定管,溶液应按照顺序依次加入,并 注意避免产生气泡。如果样品中的酶活性过高,可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。样品的检测能设置平行孔。
4、分光光度计检测405nm处吸光度,分光光度计比色杯光径0.5cm。如果没有分光光度计,亦可用酶标仪检测,但如果有条件,尽量采用分光光度计检测。蒸馏水调零,读取各管吸光度值。一般应数小时内检测完毕。
纤维蛋白溶酶测定试剂盒 Fbn 试剂盒
纤调蛋白试剂盒elisa FMOD 试剂盒
凝血酶激活的纤溶抑制物elisa方法 TAFI 试剂盒
纤溶酶原激活物抑制因子检测试剂盒 PAI  试剂盒
纤溶酶原激活剂抑制物酶联免疫试剂盒 PAI-1 试剂盒
纤溶酶原激活剂ELISA试剂盒 PLGA 试剂盒
纤溶酶原进口试剂盒 Plg 试剂盒
纤溶酶抗纤溶酶复合物试剂盒 试剂盒
纤维蛋白溶酶定量试剂盒 PL试剂盒
纤连蛋白测定试剂盒 FN  试剂盒
细小病毒B19试剂盒elisa parvovirus B19试剂盒
细菌性阴道病elisa方法 BV 试剂盒
细胞周期素A2检测试剂盒 Cyclin-A2 试剂盒
细胞周期蛋白依赖性激酶2酶联免疫试剂盒 CDK2 试剂盒
细胞周期蛋白A1ELISA试剂盒 CCNA1 试剂盒
细胞纤维连接蛋白进口试剂盒 cFn 试剂盒
细胞外基质磷酸糖蛋白试剂盒 MEPE 试剂盒
21-羟化酶定量试剂盒 CYP21B 试剂盒
21-羟化酶测定试剂盒 CYP21A 试剂盒
细胞色素P450试剂盒elisa CPY450 试剂盒
细胞色素c氧化酶亚基VIB多肽1elisa方法 cytochrome c oxidase subunit Vib polypeptide 1试剂盒
细胞色素c氧化酶Ⅵα亚基多肽1检测试剂盒 COX6A1 试剂盒
细胞色素C氧化酶酶联免疫试剂盒 COX 试剂盒
细胞色素C-1ELISA试剂盒 CYC1 试剂盒
细胞色素b561进口试剂盒 LCN2 试剂盒
埃兹蛋白试剂盒 CVL 试剂盒
细胞膜表面免疫球蛋白定量试剂盒 SmIg 试剂盒
血清游离胆固醇 FC含量测定细胞膜DNA抗体测定试剂盒 cmDNA 试剂盒
细胞角蛋白21-1片段试剂盒elisa CYFRA21-1 试剂盒
细胞角蛋白20elisa方法 CK20 试剂盒
细胞角蛋白19检测试剂盒 CK-19 试剂盒
细胞角蛋白18-M65酶联免疫试剂盒 CK 18-M65 试剂盒
细胞角蛋白18-M30ELISA试剂盒 CK 18-M30 试剂盒
细胞角蛋白18进口试剂盒 CK-18 试剂盒
细胞角蛋白17试剂盒 CK-17  试剂盒
细胞角蛋白13定量试剂盒 CK-13 试剂盒
细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4测定试剂盒 CTLA-4 试剂盒
细胞毒素相关蛋白A试剂盒elisa CagA 试剂盒
细胞毒素elisa方法 CTX 试剂盒
细胞凋亡抑制因子检测试剂盒 IAP 试剂盒
细胞凋亡相关斑点样蛋白酶联免疫试剂盒 PYCARD 试剂盒


上一篇:液压马达柱塞泵A2F23L5S5...
下一篇:S200B 双钳数字相位伏安表