生化法检测试剂盒:分光光度法、微量法、比色法、酶标法、高液相色谱法,研发,*技术研发团队,操作简便快捷,规格合理、系列成套,价格合理,是广大科研工作者的好选择,详细产品咨询:
产品名称:谷胱甘肽-S转移酶GSH-ST测试盒
检测方法:盒
规格:100管/48样 50管/24样
样品制备:
1). 直接或稀释使用清亮无色中性液体样品,体积可达2.000ml。
2). 过滤混浊溶液。
3). 除去样品中的CO 2 (果糖含量测试盒说明书过过滤)。
4 ). 果糖含量测试盒说明书过加氢氧化钾或氢氧化钠将酸性样品的PH值调至8.0。
5 ). 调整酸性浅色样品的PH值至8.0,孵育约15分钟。
6 ). 用空白样品做对照测定有色样品(如有必要调整PH值至8.0)。
7 ). 用PVPP( 聚乙烯吡咯烷酮)或聚酰胺处理深色未经稀释或体积更大的样品。
8 ). 压碎、搅匀固体或半固体样品,用水溶解提取。
9 ). 用Carrez试剂将含有蛋白质的样品去蛋白。
10).含脂肪的样品用热水提取。
需自备的仪器和用品:
液相色谱仪、示差折光检测器、低速离心机、溶剂抽滤装置、超声波清洗器、针头式过滤器(水系,50个,0.22μm)、滤膜(水系1个,0.45μm)、钙柱(Carbomix Ca-NP10,7.8 ×300 mm)、可调式移液器、样品瓶(50个,2mL)、纯水。
通用规则:
1、洗液不够时,可用蒸馏水自行配制PH7.4,0.02M的磷酸缓冲液,加入0.1%的吐温20作为洗液。加入1/1000的叠氮钠后可长期保存。
2、液体全部加完后,可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动30秒,混匀液体。也可以用酶标仪的晃动功能。
3、底物有一定的毒性,终止液对皮肤有腐蚀性,应尽量避免接触。
4、检测前,要打开酶标仪,使之稳定10分钟以上。
5、吸取液体时,要用量程和需要量接近的枪去吸,减少误差。
6、将液体加到酶标孔中时,避免枪头和孔内液体接触,可使枪头上的液滴和孔壁接触,液滴会自然流下去。
7、温浴时,要用不干胶或胶带纸封好酶标板,防止水分的蒸发。
8、洗板时,每次洗液加入后,应静置1分钟,使清洗更加。没有洗板机时,倒去液体后,要将酶标板在报纸或毛纸上用力拍干。
9、用枪吸取液体时速度不能太快,以免产生气泡而使吸取量不准确。
10、底物是光敏感的,要在临用前现配。
实验结果判断我有妙招:
1、定量测定结果根据标准曲线计算样品中待测物的含量。
2、以样品孔的OD值大于阴性对照OD值+2~3SD,作为阳性结果的阈值。
3、以P/N值(阳性孔OD值/阴性孔OD值)大于或等于2.1为阳性,P/N值小于2.1,但大于1.5为可疑,P/N小于1.5为阴性。
4、ELISA试剂盒目测定性法:加入底物经酶解和终止反应后,肉眼观察阳性孔颜色明显深于(竞争法则浅于)阴性对照,与阴性对照的颜色接近者,判定为阴性。
与您分享常用不稳定试剂的分类及要求:
① 易挥发、低燃点的试剂要密封,放于阴凉、通风、远离火源处保存。
② 与水蒸气,水发生反应的物质要密封,并远离水源保存。
③ 易与氧气作用的试剂,应将其固体或晶体密封保存,不宜长期存放其水溶液,亚硫酸,氢硫酸溶液要密封存放,钾,钠,白磷更要采用液封形式。
④ 与二氧化碳反应的物质要密封保存,其相应的溶液较固体更易反应,所以更要注意密封保存。
⑤ 易挥发或自身分解的试剂要密封,放于阴凉通风处保存。
环氧树脂粘合剂506 25068-38-6 BISPHENOL A DIGLYCIDYL ETHER RESIN
黄豆苷 552-66-9 Daidzin
谷胱甘肽-S转移酶GSH-ST测试盒磺胺苯吡唑 526-08-9 SULFAPHENAZOLE
磺胺二甲恶唑 729-99-7 SULFAMOXOL
磺胺二甲异嘧啶 515-64-0 SULFISOMIDINE
磺胺喹 59-40-5 Sulfaquinoxaline
周效磺胺;磺胺邻二甲氧嘧啶 2447-57-6 Sulfadoxine
磺胺噻唑钠 ≥99% 144-74-1 Sulfathiazole sodium
磺胺硝苯 122-16-7 SULFANITRAN
磺胺异恶唑 127-69-5 Sulfisoxazole
磺酰罗丹明B 3520-42-1 SULFORHODAMINE B
活性橙16 12225-83-1 REACTIVE ORANGE 16
霍乱毒素B亚基 (2-8℃) 131096-89-4 CHOLERA TOXIN B SUBUNIT
肌苷-5’-磷酸二钠盐 20813-76-7 5'-INOSINIC ACID DISODIUM SALT HYDRATE
肌球素(-20℃) 100684-32-0 MYOGLOBIN FROM HORSE SKELETAL MUSCLE*
己二酸二[2-(2-丁氧基乙氧基)乙酯 141-17-3 BIS[2-(2-BUTOXYETHOXY)ETHYL] ADIPATE
己二酸二酰肼 1071-93-8 Adipic dihydrazide
季铵盐 336 63393-96-4 ADOGEN(R) 464
季戊四醇丙氧基化物 9051-49-4 PENTAERYTHRITOL PROPOXYLATE
季戊四醇三丙烯酸酯 3524-68-3 Pentaerythritol triacrylate
季戊四醇四(3-巯基丙酸酯) 7575-23-7 PENTAERYTHRITOL TETRA(3-MERCAPTOPROPIONATE)
季戊四醇缩水甘油醚 3126-63-4 Pentaerythritol glycidyl ether
甲氨嘌呤 NA
甲苯-alpha,alpha,alpha-d3 1124-18-1 TOLUENE (METHYL-D3)
甲醇钾 865-33-8 Potassium methoxide
甲芬那酸甲芬那酸 61-68-7 Mefenamic acid
甲烷磺酸钠 2386-57-4 sodiuM Methanesulfonate;Methanesulfonic acid sodiuM salt;Methanesulfonic acid.Na-salt
甲基-1H-苯并*(混合物) 29385-43-1 Tolyltriazole
甲基苯基硅烷 766-08-5 METHYLPHENYLSILANE
甲基丙烯醛;异丁烯醛;2-甲基丙烯醛 78-85-3 Methacrolein;Methacrylaldehyde;2-Methylpropenal
甲基丙烯酸2-(三甲基硅氧基)乙酯(含稳定剂BHT) 17407-09-9 2-(TRIMETHYLSILOXY)ETHYL METHACRYLATE
甲基丙烯酸-2-(二甲氨基)乙酯;甲基丙烯酸 N,N-二甲氨基乙酯
操作步骤(仅供参考):
1.配制65mM H2O2基液:本试剂盒提供的H2O2基液中的H2O2浓度约为1M。由于过 氧化氢不是非常稳定,使用前需自行测定过氧化氢的实际浓度。把浓度约为1M的H2O2基液用本试剂盒提供的CAT Assay buffer稀释100倍,使H2O2基液中的H2O2浓度约为10mM。
2.准备样品:
a,细胞或组织样品:取恰当细胞或组织进行裂解,可以采用Leagene Western及IP 细胞裂解液,如果有必要需进行适当匀浆,低速离心取上清,-70℃冻存,用于CAT的检测。
b,血浆、血清和尿液样品:血浆、血清按照常规方法制备,用生理盐水10倍稀释后, 可以直接用于本试剂盒的测定,尿液通常也可以直接用于测定,-70℃冻存,用于CAT的检测。
c,全血样品:收集适量的全血(whole blood)至一抗凝管内,颠倒混匀。取100μl全 血冻融一次,用CAT Assay buffer1000倍后进行CAT检测。
d,血液中的红细胞裂解液:用抗凝管收集血液,颠倒混匀。取至少500μl全血4℃ 3000g离心5min,弃上清,沉淀用预冷的生理盐水洗涤3次。
,高活性样品:如果样品中含有较高活性的CAT,可以使用CAT Assay buffer稀释。
f,(选做)样品准备完毕后可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度,以便于后续 计算单位蛋白重量组织或细胞内的CAT含量。
3、 CAT检测:按照下表设置空白管、自身对照管、测定管,溶液应按照顺序依次加入,并 注意避免产生气泡。如果样品中的酶活性过高,可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。样品的检测能设置平行孔。
4、分光光度计检测405nm处吸光度,分光光度计比色杯光径0.5cm。如果没有分光光度计,亦可用酶标仪检测,但如果有条件,尽量采用分光光度计检测。蒸馏水调零,读取各管吸光度值。一般应数小时内检测完毕。