GT38细胞

发布时间:2021-08-20

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英文简称:GT38细胞
产品名称:胃癌细胞
规格:胃癌
形态特性:1640
生长特性:贴壁
特征特性:
培养条件:

实验要点及说明:

1.本方法适用于贴壁细胞培养,而不适用于悬浮细胞培养,悬浮细胞可使用滴片法; 

2.所使用的盖玻片应该为玻璃制造,并经过铬酸洗液处理; 

3.盖玻片非常薄,易碎,取放盖玻片时动作要轻; 

4.如果需要更多生长状态一致的细胞,可以使用较大的培养皿,但不宜过大,以避免培养液的浪费和增加污染机率; 

5.如果细胞贴壁生长能力较差,可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。

小鼠肝实质细胞
实验事项:

1. 试剂准备:所有试剂都必须在使用前达到室温,使用后请立即按照说明书要求保存试剂。  实验操作中请使用一次性的吸头,避免交叉污染。

2.   加样:加样或加试剂时,请注意在吸取标本 / 标准品,酶结合物或底物时,前一个孔与后一个孔加样之间的时间间隔如果太大,将会导致不同的“预孵育"时间,从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。一次加样时间(包括标准品及所有样品)好控制在10分钟内,如标本数量多,使用多道移液器加样。

3.   孵育:为防止样品蒸发,试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内,酶标板加上盖或覆膜,以避免液体蒸发;洗板后应尽快进行下步操作,任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态;同时应严格遵守给定的孵育时间和温度。

4.   洗涤:洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干,勿将滤纸直接放入反应孔中吸水,同时要消除板底残留的液体和手指印,避免影响后的酶标仪读数。

5.  试剂配制:Detection A及Detection B在使用前请手甩几下或少时离心处理,以使管壁或瓶盖的液体沉积到管底。标准品、检测溶液A工作液、检测溶液B工作液请依据所需的量配置使用,并使用相应的稀释液配制,不能混淆。请确配置标准品及工作液,尽量不要微量配置(如吸取检测溶液A时,一次不要小于10μl),以避免由于不准确稀释而造成的浓度误差;请勿重复使用已稀释过的标准品、检测溶液A工作液或检测溶液B工作液。

6.  反应时间的控制:加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化(比如,每隔10分钟),如颜色较深,请提前加入终止液终止反应,避免反应过强从而影响酶标仪光密度读数。

7.  底物:底物请避光保存,在储存和温育时避免强光直接照射。

    建议检测样品时均设双孔测定,以保证检测结果的准确性。

    如标本中待测物质含量过高,请先稀释后再测定,计算时请后乘以稀释倍数。

培养步骤:

对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:

1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。

4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:

方法一:收集细胞,1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

方法二:可选择半数换液方式,弃去半数培养基后,将剩余细胞悬起,将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
白介素18受体辅助蛋白(IL18RAP)ELISA试剂盒; IL18RAP ELISA Kit
白介素18受体1(IL18R1)ELISA试剂盒; IL18R1 ELISA Kit
白介素18结合蛋白(IL18BP)ELISA试剂盒; IL18BP ELISA Kit
白介素18(IL18)ELISA试剂盒; IL18 ELISA Kit
白介素17受体A(IL17RA)ELISA试剂盒; IL17RA ELISA Kit
白介素17F(IL17F)ELISA试剂盒; IL17F ELISA Kit
白介素17D(IL17D)ELISA试剂盒; IL17D ELISA Kit
白介素17C(IL17C)ELISA试剂盒; IL17C ELISA Kit
白介素17(IL17)ELISA试剂盒; IL17 ELISA Kit
白介素16(IL16)ELISA试剂盒; IL16 ELISA Kit
白介素15(IL15)ELISA试剂盒; IL15 ELISA Kit
白介素13(IL13)ELISA试剂盒; IL13 ELISA Kit
白介素12受体β2(IL2Rβ2)ELISA试剂盒; IL2Rβ2 ELISA Kit
白介素12B(IL12B)ELISA试剂盒; IL12B ELISA Kit
白介素12A(IL12A)ELISA试剂盒; IL12A ELISA Kit
白介素12(IL12)ELISA试剂盒; IL12 ELISA Kit
白介素11受体α(IL11Rα)ELISA试剂盒; IL11Rα ELISA Kit
白介素11(IL11)ELISA试剂盒; IL11 ELISA Kit
白介素10受体α(IL10Rα)ELISA试剂盒; IL10Rα ELISA Kit
白介素10(IL10)ELISA试剂盒; IL10 ELISA Kit
白喉素合酶(DPH5)ELISA试剂盒; DPH5 ELISA Kit
巴特蛋白(BART)ELISA试剂盒; BART ELISA Kit
八聚体结合转录因子4(OCT4)ELISA试剂盒; OCT4 ELISA Kit
八聚体结合转录因子2(OCT2)ELISA试剂盒; OCT2 ELISA Kit
八聚体结合转录因子1(OCT1)ELISA试剂盒; OCT1 ELISA Kit
胺甲基四氢叶酸环化脱氢酶(FTCD)ELISA试剂盒; FTCD ELISA Kit
氨乙酰丙酸δ脱水酶(ALAD)ELISA试剂盒; ALAD ELISA Kit
氨酰tRNA合成酶复合多功能相互作用蛋白1(AIMP1)ELISA试剂盒; AIMP1 ELISA Kit
氨肽酶O(APO)ELISA试剂盒; APO ELISA Kit
氨甲基转移酶(AMT)ELISA试剂盒; AMT ELISA Kit
氨基乙二酸转氨酶(AADAT)ELISA试剂盒; AADAT ELISA Kit
氨基酰化酶2(ACY2)ELISA试剂盒; ACY2 ELISA Kit
氨基酰化酶1(ACY1)ELISA试剂盒; ACY1 ELISA Kit
氨基己糖苷酶Bβ(HEXβ)ELISA试剂盒; HEXβ ELISA Kit
氨基己糖苷酶Aα(HEXα)ELISA试剂盒; HEXα ELISA Kit
氨基端前心钠肽(NT-ProANP)ELISA试剂盒; NT-ProANP ELISA Kit
氨基端前脑钠素(NT-ProBNP)ELISA试剂盒; NT-ProBNP ELISA Kit
安定结合抑制因子(DBI)ELISA试剂盒; DBI ELISA Kit
艾杜糖-2-硫酸酯酶(IDS)ELISA试剂盒; IDS ELISA Kit
癌调蛋白2(OCM2)ELISA试剂盒; OCM2 ELISA Kit
癌调蛋白(OCM)ELISA试剂盒; OCM ELISA Kit
癌胚抗原相关细胞粘附分子8(CEACAM8)ELISA试剂盒; CEACAM8 ELISA Kit
癌胚抗原相关细胞粘附分子7(CEACAM7)ELISA试剂盒; CEACAM7 ELISA Kit
癌胚抗原相关细胞粘附分子6(CEACAM6)ELISA试剂盒; CEACAM6 ELISA Kit
癌胚抗原相关细胞粘附分子1(CEACAM1)ELISA试剂盒; CEACAM1 ELISA Kit
GT38细胞癌胚抗原(CEA)ELISA试剂盒; CEA ELISA Kit


操作流程:

1.1主要试剂与仪器:倒置相差显微镜(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。

1.2 hek-293细胞的复苏培养传代及冻存:

1.2.1 细胞的复苏培养 从液氮罐中取出冻存管,立即投入37℃水浴,并不断的摇动,使之迅速融化。 将溶解的细胞冻存管取出,用酒精消毒后打开,吸出溶有细胞的冻存液,加入事先装好培养液(37℃预热,8~10倍体积)离心管内,稍微吹打混匀,然后1000rpm 5min,去除上清,加入适量培养液,吹打成细胞悬液, 以1×105/ml密度接种于25cm2培养瓶内,在37℃、5%co2及饱和湿度下培养。

1.2.2 细胞传代 原代培养的hek-293细胞48h换液1次,细胞长至60%~70%融合时,用0.25%胰酶消化1~2min,将培养瓶再用手掌轻轻敲打使细胞脱壁、悬浮、分散,为使细胞进一步分散可用吹打管轻轻吹打几次,获得细胞悬液,然后加入倍量的培养基,温和混匀,吸管分装混合液,传代扩增细胞。

1.3 细胞形态的观察 在倒置显微镜下观察并记录细胞的生长情况及形态特征。

1.4 细胞的计数 常规消化细胞,待细胞变圆、脱壁并浮起,加入少量培养基离心,再用pbs重悬并吹打制成细胞悬液。在细胞计数板盖玻片的一侧加微量细胞悬液,用10×物镜观察计数板四角大方格细胞数,按公式计算出细胞数。细胞数/ml原液=(四方格细胞数之和/4) ×104。

1.5 细胞的贴壁率 指数生长期的细胞,以0.25%胰酶消化成单细胞悬液,计数后分别接种于12个25cm2培养瓶中,每两小时随机取出3瓶细胞,吸除培养基及未贴壁细胞,加入胰消化酶消化、计数已贴壁细胞,取其平均值,按照公式:贴壁率(%)=(已贴壁细胞数/接种细胞数) ×100%,计算贴壁率。

1.6 生长曲线 取指数生长期的细胞用胰酶消化制成单细胞悬液,以1×104/孔接种于24孔板,每孔加入1ml培养基。每天随机取3孔,计数每孔细胞的数目并计算平均值。连续计数10d,绘制细胞生长曲线。

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