
组织消化过程中常常遇到很多的问题,例如:消化不完全、细胞死亡率高等。如何克服这些问题呢,消化酶的选择是关键。下面,一起来了解常用的消化酶。
1. 胰蛋白酶
胰蛋白酶(Trypsin)是目前应用*广泛的消化酶,为肽链内切酶,对精氨酸和赖氨酸肽链具有选择性水解作用,可使天然蛋白、变性蛋白、纤维蛋白和黏蛋白等水解为多肽或氨基酸。胰蛋白酶的作用是使细胞间的蛋白质水解从而使细胞离散。不同的组织或者细胞对胰酶的作用反应不一样。胰酶分散细胞的活性还与其浓度、温度和作用时间有关,在 pH 为 8.0 、温度为 37℃ 时,胰酶溶液的作用能力*强。使用胰酶时,应把握好浓度、温度和时间,以免消化过度造成细胞损伤。因Ca2+、Mg2+和血清、蛋白质可降低胰酶的活性,所以配制胰酶溶液时应选用不含Ca2+、Mg2+的BSS,如:D-Hanks液。终止消化时,可用含有血清培养液或者胰酶抑制剂终止胰酶对细胞的作用。EDTA也可以用来增强胰蛋白酶的水解功能。胰蛋白酶适用于消化细胞间质较少的软组织,如胚胎、上皮、肝、肾等组织。而对于纤维组织和较硬的癌组织效果差,常常将胰蛋白酶与其他消化酶联合使用。
2. 胶原酶
胶原酶(Collagenase)通过水解细胞间质的脯氨酸,从而使细胞离散。胶原酶按其存在的方式不同可分为人体内源性胶原酶和药用胶原酶两种。胶原酶对胶原的消化作用很强,它仅对细胞间质有消化作用而对细胞损害不大,因此适于消化分离纤维性组织、上皮和较硬的癌组织。钙镁离子和血清不会对胶原酶的活性及消化作用产生影响。胶原酶可细分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型胶原酶,不同类型胶原酶适用范围不同。

3. 透明质酸酶
透明质酸酶(Hyaluronidase)通过随机降解透明质酸的β-N-乙酰己糖胺-[1-4]糖苷键,从而降低透明质酸的活性,常与胶原酶等联合使用,用于结缔组织的分离。
4. 脱氧核糖核酸酶Ⅰ
脱氧核糖核酸酶Ⅰ(DeoxyribonucleaseⅠ, DNaseⅠ)是一种核酸内切酶,作用于细胞分离降解出的DNA,防止DNA导致的细胞凝集,对细胞完整性无破坏作用。通常配合胶原酶或透明质酸酶等联合使用,不会单独使用。
5. 中性蛋白酶
中性蛋白酶(Neutral protease)是由枯草芽孢杆菌经发酵提取而得的,属于一种内切酶,可用于各种蛋白质水解处理。在一定温度、PH值下,能将大分子蛋白质水解为氨基酸等产物。可广泛应用于动植物蛋白的水解,具有温和的蛋白酶水解活性,不会损坏细胞膜的完整性,常与胶原酶等联合使用,其分离纤维样组织的效率高于上皮组织。
6. 弹性蛋白酶
弹性蛋白酶(Elastase)由动物的胰脏用水提取而得,也可用细菌的培养液在低温下用水提取而得。通过作用于弹性蛋白的肽键、酰胺键和酯键将其水解,常与胰蛋白酶和胶原酶等联合使用,用于分离结缔组织和含有大量细胞网状纤维的组织。
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