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英文简称:MCF-12A细胞
产品名称:乳腺上皮细胞
规格:非致瘤性乳腺上皮细胞;女性
形态特性:EMEM
生长特性:贴壁
特征特性:
培养条件:
细胞培养操作规程:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;胎牛血清,10%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。
二.细胞处理:
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养*。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
细胞培养的优点:
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中,根据要求可始终保持细胞活力,并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况,包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后,所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞,需要时,可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。
细胞培养方法:
1、细胞传代:细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%胰酶(T25瓶),使胰酶覆盖整个瓶或皿,盖好放入培养箱消化;
③1-2min后,显微镜下观察细胞,若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化;若细胞还是贴壁,放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止;
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清;
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中,T25培养瓶加6-8ml培养基;
⑥悬浮细胞直接离心收集,细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、细胞复苏:
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化,时间1min左右,加入4-5ml培养基混匀。
②在1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1-2ml培养基吹匀,将细胞悬液加入培养瓶中,补加适量培养基。
3、细胞冻存:待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次,加入1mL 0.25%胰蛋白酶(T25瓶)
②1-2min后,显微镜下观察细胞,大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化;
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1ml冻存液重悬细胞;
④将冻存管放入程序降温盒,放入-80℃冰箱,4小时后将冻存管转入液氮罐储存。
(Mouse ovarian cancer marker-CA125) ELISA Kit 小鼠卵巢癌标志物CA125 96T
HD ELISA Kit 大鼠组织蛋白去乙酰化酶 96T
(Mouse mammary carcinoma Marker-CA153) ELISA Kit 小鼠乳腺癌标志物-CA153 96T
AFP-L1(Human alpha-fetoprotein Lens culinaris agglutiin 1) ELISA Kit 人小扁豆素结合型甲胎蛋白/甲胎蛋白异质体1 96T
MART/Melan-A(Human Melanoma Marker A) ELISA Kit 人黑色素瘤标记物 96T
(Mouse Gastrointestinalcancer Marker-CA199) ELISA Kit 小鼠胃肠癌标志物CA199 96T
E-Selectin/CD62E ELISA Kit 大鼠E选择素 96T
Methylase ELISA Kit 大鼠甲基化酶 96T
HO-1(Mouse heme oxygenase 1) ELISA Kit 小鼠血红素氧合酶1 96T
CK-HMW(Human cytokeratin High Molecular Weight) ELISA Kit 人高分子量细胞角蛋白 96T
PL-A2(Mouse Phospholipidase A2) ELISA Kit 小鼠磷脂酶A2 96T
PCNA ELISA Kit 大鼠抗增殖细胞核抗原抗体 96T
MCF-12A细胞PHC(Human primary hepatic carcinoma) ELISA Kit 人肝癌抗原 96T
Apaf-1(Human apoptosis protease activating factor-1) ELISA Kit 人凋亡蛋白酶激活因子1 96T
TFPI(Mouse Tissue factor pathway inhibitor) ELISA Kit 小鼠组织因子途径抑制物 96T
LPL ELISA Kit 大鼠脂蛋白脂酶 96T
TRACP-5b ELISA Kit 大鼠抗酒石酸酸性磷酸酶5b 96T
AQP-5(Mouse Aquaporin 5) ELISA Kit 小鼠水通道蛋白5 96T
NPC(Human nasopharyngeal carcinoma) ELISA Kit 人鼻咽癌 96T
AQP-4(Mouse Aquaporin 4) ELISA Kit 小鼠水通道蛋白4 96T
GIP ELISA Kit 大鼠葡萄糖依赖性胰岛素释放多肽 96T
UBC(Human urinary bladder cancer antigen) ELISA Kit 人膀胱癌抗原 96T
AQP-3(Mouse Aquaporin 3) ELISA Kit 小鼠水通道蛋白3 96T
GP-II ELISA Kit 大鼠糖原磷酸化酶同工酶II 96T
P-CK(Human pan-cytokeratin) ELISA Kit 人广谱细胞角蛋白 96T
GP-MM ELISA Kit 大鼠糖原磷酸化酶同工酶MM 96T
AQP-1(Mouse Aquaporin 1) ELISA Kit 小鼠水通道蛋白1 96T
Human Oncogene Protein p190/bcr-abl ELISA Kit 人癌基因蛋白质p190/bcr-abl 96T
BTA(Human Bladder tumor antigen) ELISA Kit 人膀胱肿瘤抗原 96T
AQP-0(Mouse Aquaporin 0) ELISA Kit 小鼠水通道蛋白0 96T
GP-BB ELISA Kit 大鼠糖原磷酸化酶同工酶BB 96T
AQP-2(Mouse Aquaporin 2) ELISA Kit 小鼠水通道蛋白2 96T
TAb ELISA Kit 大鼠甲状腺素抗体 96T
MK(Human Midkine) ELISA Kit 人中期因子 96T
TRAb ELISA Kit 大鼠抗促甲状腺素受体抗体 96T
Bid(Human BH3 interacting domain death agonist) ELISA Kit 人BH3结构域凋亡诱导蛋白 96T
TG(Mouse Thyroglobulin) ELISA Kit 小鼠甲状腺球蛋白 96T
INH-A(Mouse Inhibin) ELISA Kit 小鼠抑制素A 96T
CA ELISA Kit 大鼠儿茶酚胺 96T
Bcl-2(Human B-cell leukemia/lymphoma 2) ELISA Kit 人B细胞淋巴瘤因子2 96T
IL-27 ELISA Kit 大鼠白介素27 96T
Beta-CG(Mouse Chorionic Gonadotrophin Beta) ELISA Kit