操作流程:
收集基因信息——>设计引物——>PCR ——>回收目的片段——>与载体连接,取得连接产物 ——> 用感受态细胞做转化 ——>接菌——>阳性克隆鉴定(酶切法或PCR)——>质粒抽提——>质粒测序——>测序结果分析——>克隆信息输入数据库——>质粒实物保存。
本品是在室温条件下长期保存用于DNA提取的血液样品的保存液，它通过裂解细胞并高效抑制DNase的活性而达到长期保证DNA分子的完整性。
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产品名称 |
规格 |
保存 |
货号 |
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基孔肯尼雅病毒RT-PCR试剂盒 |
50次 |
负20度 |
BH-P63371 |
组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
使用方法：
一、样品DNA的制备
用自选方法提取细菌样品DNA。注意：DNA纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品DNA，后面的PCR再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备O157:H7标准曲线（以10-10E6这6个10倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。
1. 标记6个离心管，分别为6，5，4，3，2和1号。
2. 用带芯枪头分别加入45 μL纯水（*用带芯枪头，下同）。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用TE缓冲液或纯水10倍梯度稀释到10E7拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至10E7拷贝/μL，建议每次稀释10倍，梯度稀释至10E7拷贝/μL）。
4. 在6号管中加入5 μL 10E7拷贝/μL的O157:H7阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得10E6拷贝/μL的阳性对照。
5. 换枪头，从6号管中取5 μL溶液到5号管中，充分震荡1分钟，得10E5拷贝/μL的阳性对照。
6. 换枪头，从5号管中取5 μL溶液到4号管中，重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。
7. NC管中不加任何阳性对照。
8. 从1-6号管中分别取5 μL和待测样品一起进行定量PCR（见下步），每个样品做3次重复。PCR后得到每个阳性对照稀释样品的荧光PCR Ct值，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。
实验注意事项：
1）RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料，不同的样本有不同要求，实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况；
2）客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号；
3）客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4）样本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，*通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量（包括定量和相对定量）和定性分析。
主要服务：DNA或RNA的*定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术：引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR
神经颗粒素检测试剂盒异 >99.0% (GC)(含100ppm BHT稳定剂)L-苹果酸 98%Anti-Phospho-PEA15 (Ser116) 磷酸化星形胶质PEA15抗体
传染性胸膜肺炎检测试剂盒异佛尔酮 97%L-苹果酸 CPAnti-PEDF 色素上皮源性因子抗体
可替宁检测试剂盒异 ACS, ≥99.5% 顺二酸 AR,99.5%Anti-PEG10 肝癌高表达基因抗体
激肽释放酶原检测试剂盒烯酸异癸酯 98%,含70-100ppm对苯二酚稳定剂顺二酸 CP,99%Anti-PEG3 PEG3蛋白抗体
硫代酸反应物检测试剂盒甲基烯酸月桂酯 96%顺二酸 药用级，EP,USPAnti-Enkephalin 脑啡肽抗体
碱性磷酸酶检测试剂盒α-甲基烯酸 >99.0%(GC),250ppm MEHQ做稳定剂D-苹果酸 99%Anti-PEPT1 肠道肽转运蛋白1/小肽转运蛋白1抗体
蔗糖异麦芽糖酶检测试剂盒α-甲基烯酸 >99.0%(GC),250ppm MEHQ做稳定剂单硬脂酸甘油酯 >60.0%(GC)Anti-PEPT2/SLC15A2 肠道肽转运蛋白2抗体
蔗糖异麦芽糖酶检测试剂盒甲基异丁(MIBC) 99%单硬脂酸甘油酯 99%(GC)Anti-peripherin 外周蛋白抗体
白介素39检测试剂盒乙酰乙酸甲酯 CP，98%L-半胱氨酸 ≥98%,非动物源，用于培养Anti-PERK 蛋白激酶样内质网激酶抗体
颗粒酶A检测试剂盒甲基异丁酮 >99.5%(GC)安息香 99.5%Anti-Phospho-PERK (Thr980) 磷酸化蛋白激酶样内质网激酶抗体
穿孔素;成孔蛋白检测试剂盒壬基酚 GR联苯甲酰 99.0%Anti-PFK2/PFKFB3 6磷酸果糖激酶2抗体
壳三糖酶检测试剂盒壬基酚(混合物) SU安息香二甲 99%Anti-Phospho-PFK2 (Ser466) 磷酸化6磷酸果糖激酶2抗体
登革热病检测试剂盒壬基酚 分析标准品1-羟环己基苯酮 98%Anti-Fascin1 纤维束1抗体
乙型肝炎病检测试剂盒对壬基酚 85%2-羟基-2-酮 97%Anti-phospho-FSCN1(Ser39) 磷酸化纤维束蛋白同源物1抗体
丝氨酸蛋白酶抑制剂B1检测试剂盒对壬基酚 98%乙(95%) AR,95.0%Anti-PG-C 胃蛋白酶原C抗体
基孔肯尼雅病毒RT-PCR试剂盒人胰腺再生蛋白3γ(REG3γ)酶联免疫吸附测定试剂盒Human GMPR ELISA KitBcl-2同源结构域蛋白抗体
人S100钙结合蛋白A8(S100A8)酶联免疫吸附测定试剂盒Human GMPS ELISA Kit骨形态发生蛋白4抗体
人S100钙结合蛋白A9(S100A9)酶联免疫吸附测定试剂盒Human GNA14 ELISA Kit脑和急性白血病胞浆蛋白抗体
人G蛋白偶联受体37(GPR37)酶联免疫吸附测定试剂盒Human GLYAT ELISA Kit骨髓基质干抗原2抗体
人S100钙结合蛋白A11(S100A11)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human Glutamate receptor 2 ELISA Kit组蛋白相关Bmi1抗体
人S100钙结合蛋白A12(S100A12 )酶联免疫吸附测定试剂盒Human GLRA2 ELISA Kit癌转移抑制基因1抗体
人S100钙结合蛋白A13(S100A13 )酶联免疫吸附测定试剂盒Human GLRA3 ELISA Kit大脑富含鸟苷酸激酶相关蛋白抗体
