操作流程:
产品名称
规格
保存
货号
非洲猪瘟病毒探针法荧光定量PCR试剂盒
50次
负20度
BH-P63414
组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
使用方法：
一、样品DNA的制备
用自选方法提取细菌样品DNA。注意：DNA纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品DNA，后面的PCR再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备O157:H7标准曲线（以10-10E6这6个10倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。
1. 标记6个离心管，分别为6，5，4，3，2和1号。
2. 用带芯枪头分别加入45 μL纯水（*用带芯枪头，下同）。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用TE缓冲液或纯水10倍梯度稀释到10E7拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至10E7拷贝/μL，建议每次稀释10倍，梯度稀释至10E7拷贝/μL）。
4. 在6号管中加入5 μL 10E7拷贝/μL的O157:H7阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得10E6拷贝/μL的阳性对照。
5. 换枪头，从6号管中取5 μL溶液到5号管中，充分震荡1分钟，得10E5拷贝/μL的阳性对照。
6. 换枪头，从5号管中取5 μL溶液到4号管中，重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。
7. NC管中不加任何阳性对照。
8. 从1-6号管中分别取5 μL和待测样品一起进行定量PCR（见下步），每个样品做3次重复。PCR后得到每个阳性对照稀释样品的荧光PCR Ct值，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。
实验注意事项：
1）RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料，不同的样本有不同要求，实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况；
2）客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号；
3）客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4）样本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，*通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量（包括定量和相对定量）和定性分析。
主要服务：DNA或RNA的*定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术：引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR
白介素1β前体检测试剂盒硫酸软骨素A钠盐 85%4-苯甲 97%Anti-UCP-2 线粒体脱偶连蛋白2抗体
转录因子维甲酸相关孤儿受体检测试剂盒肝素锂 ≥150 USP units/mg4-苯酚 98%Anti-UCP-3 线粒体脱偶连蛋白3抗体
膜攻击复合物检测试剂盒肝素锂 ~200 units/mg4-苯乙 97%Anti-Uteroglobin 珠蛋白抗体
脂肪膜关联蛋白检测试剂盒肝素钠 185 USP units/mg 对甲苯 98%Anti-ULBP1/N2DL1 UL16结合蛋白1蛋白抗体
色素P45019A1检测试剂盒透明质酸钠 95%，来源：鸡冠2,4,6-三 98%Anti-ULBP2/N2DL2 UL16结合蛋白2抗体
CD47分子检测试剂盒2-溴乙基乙酸酯 97%(甲氧基)三苯基氯化磷 98%Anti-ULBP3/N2DL3 UL16结合蛋白3抗体
肾紧张素A1检测试剂盒2-溴乙 96%4-甲氧基苯乙炔 99%Anti-USF-1 等上游激因子1抗体
CD68分子检测试剂盒2-溴乙 分析标准品4-正戊基环己酮 98%Anti-VPS18 空泡分选蛋白18抗体
Ⅱ型前胶原羧基端肽检测试剂盒1,4-环己二酮单乙二缩酮 98%4-正-丁基-4-基联苯 98%Anti-Ubiquitin/UBC/UBB 泛素蛋白抗体
Ⅱ型原胶原N端前肽检测试剂盒氧溴化磷 98%4-正戊氧基苯乙酰 99%Anti-USP1 泛素特异性蛋白酶1抗体
ⅡA型原胶原N端前肽检测试剂盒三异基亚磷酸酯 90%4-正基乙炔 98%Anti-VAMP-1/Synaptobrevin-1 VAMP1囊泡相关膜蛋白1抗体
蛋白酪氨酸磷酸酶1B检测试剂盒三异基亚磷酸酯 95%4-正戊基苯酸 97%Anti-VAMP-2 囊泡相关膜蛋白2抗体
T2素检测试剂盒硅酸 AR1-溴-4-戊苯 97%Anti-VAMP-3 囊泡相关膜蛋白3抗体
结核分枝杆菌Y-干扰素检测试剂盒硅酸 99.9%
羟赖氨酸吡啶啉检测试剂盒薄层层析硅胶板 50×200mm GF254型号 20片/盒4-正戊基联苯 99%anti-VASH1 血管抑制蛋白1抗体
人S100钙结合蛋白P(S100P)酶联免疫吸附测定试剂盒Human FAM71E2 ELISA Kit钙周期素结合蛋白抗体
人补体受体2 (CR2/CD21)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human FAM72A ELISA Kit7号染色体开放阅读框69抗体
人白分化抗原28(CD28)酶联免疫吸附测定试剂盒Human FAM185A ELISA Kit铜代谢结构域蛋白3抗体
人白分化抗原30配体(CD30L)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human FAM186B ELISA Kit19号染色体开放阅读框71抗体
人环腺苷二磷酸核糖水解酶(cADPRH/CD38)酶联免疫吸附测定试剂盒Human FAM71F2 ELISA Kit异染色体同源蛋白1抗体
人游离前列腺特异性抗原(F-PSA)酶联免疫吸附测定试剂盒Human FAM124B ELISA Kit铜代谢结构域蛋白8抗体
收集基因信息——>设计引物——>PCR ——>回收目的片段——>与载体连接,取得连接产物 ——> 用感受态细胞做转化 ——>接菌——>阳性克隆鉴定(酶切法或PCR)——>质粒抽提——>质粒测序——>测序结果分析——>克隆信息输入数据库——>质粒实物保存。
本品是在室温条件下长期保存用于DNA提取的血液样品的保存液，它通过裂解细胞并高效抑制DNase的活性而达到长期保证DNA分子的完整性。
非洲猪瘟病毒探针法荧光定量PCR试剂盒人颗粒体蛋白(GRN)酶联免疫吸附测定试剂盒Human FAM175A ELISA Kit铜代谢结构域蛋白10抗体
