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英文简称:FAK+/+细胞
产品名称:小鼠成纤维细胞
规格:T25
形态特性:成纤维细胞
生长特性:贴壁生长
特征特性:
培养条件:DMEM高糖）+10%FBS
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养*。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
细胞培养的优点：
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。
PABPC4L 聚腺苷酸养结合蛋白4抗体
PTP4A2 肝再生磷酸酯酶2抗体
Protein Z 蛋白Z抗体
Protein S 蛋白S抗体
PEBP2B 多瘤病毒增强了结合蛋白２β抗体
PDE4D 磷酸二酯酶4D抗体
Profilin 2 前纤维蛋白2抗体
PRCP 脯氨酰羧肽酶抗体
P2Y4 P2Y4受体抗体
PEA3 瘤促活化因子3抗体
PBP 磷脂酰乙醇胺结合蛋白1抗体
peripherin 外周蛋白抗体
PSA(Pa3) 人前列腺特异性抗原单克隆抗体(包被)
PSA (PA5) 鼠抗人前列腺特异性抗原单克隆抗体(检测)
Prohibitin 抑制素/肿瘤抑制因子抗体
PAFAH 脂蛋白磷脂酶A2抗体
Protein A 重组金黄色葡萄球菌蛋白A抗体
Pescadillo 雌激素受体共调节因子抗体
Persephin PSP抗体
Pan-ras Pan ras抗体
Patched Patched/PTCH抗体
PTGEs 前列腺素E合成酶抗体
PPARGC1A 过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活子1α抗体
PLK1 丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶Plk1抗体
Phospho-PLK1 (Thr210) 磷酸化丝/苏氨酸蛋白激酶Plk1抗体
PPIG 亲环蛋白（亲环素）PPIG抗体
Phospho-PPIG (Ser376) 磷酸化亲环蛋白（亲环素）PPIG抗体
FAK+/+细胞Phospho-PRAS40 (Thr246) 磷酸化蛋白激酶AKT底物1抗体
Phospho-PRK1(Thr774) + PRK2 (Thr816) 磷酸化内分泌腺衍生血管内皮生长因子抗体
PYK2 富含脯氨酸的酪氨酸激酶2抗体
1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；
③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；
⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、细胞复苏：
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。
②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。
3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；
④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。
