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英文简称:NCI-H774细胞
产品名称:小细胞肺癌
规格:T25
形态特性:
生长特性:悬浮生长
特征特性:
"培养条件:HITES medium supplemented with 5% fetal bovine serum
The
0.005 mg/ml Insulin
0.01 mg/ml Transferrin
30nM Sodium selenite final conc.
10 nM Hydrocortisone final conc.
10 nM beta-estradiol final conc.
extra 2mM L-glutamine for final conc. of 4.5 mM
5% fetal bovine serum final conc.
"
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养*。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
细胞培养的优点：
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。
细胞培养方法：1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；
③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；
⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、细胞复苏：
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。
②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。
3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；
④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。
C13orf38 13号染色体开放阅读框38抗体
C14ORF140 14号染色体开放阅读框140抗体
CHAC2 阳离子转运调节样蛋白2抗体
C15orf62 15号染色体开放阅读框62抗体
C15orf41 15号染色体开放阅读框41抗体
CNGA2 环核苷酸阳离子通道蛋白α2抗体
CANX 钙连蛋白抗体
CRMP2 二氢嘧啶酶相关蛋白2抗体
CYP2E1 细胞色素P450ⅡE1抗体
CX3CR1 趋化因子受体1抗体
phospho-c-Raf(Ser338/Tyr340) 磷酸化原癌基因c-Raf抗体
phospho C-Myc(Thr58/pSer62) 磷酸化致癌基因C-Myc抗体
CD33 CD33抗体
phospho-c-kit(Tyr936) 磷酸化原癌基因c-kit抗体
phospho-c-Jun(Thr91+Thr93) 磷酸化原癌基因c-Jun抗体
CLCN3 氯离子通道蛋白3抗体
phospho-Cyclin E (Thr395) 磷酸化周期素E抗体
Phospho-cdc25C (Ser216) 磷酸化细胞分裂周期蛋白25C抗体
Phospho-CDK9 (Thr186) 磷酸化周期素依赖性激酶9抗体
Phospho-Connexin 43 (Ser368) 磷酸化Connexin 43蛋白抗体
cofilin 丝切蛋白抗体
phospho-Cortactin (Tyr466) 磷酸化皮层肌动蛋白抗体
Phospho-Cyclin B1 (Ser147) 磷酸化周期素B1抗体
Phospho-Cyclin B1 (Ser133) 磷酸化周期素B1抗体
Phospho-Cyclin D1 (Thr286) 磷酸化cyclin D1抗体
CD13 CD13氨肽酶N抗体
CCL20/MIP3 alpha 巨噬细胞炎性蛋白MIP-3a抗体
Connexin-32 间隙连接蛋白32抗体
CTBP1 C端结合蛋白1抗体
CK1+5+10+14 高分子量角蛋白抗体
C22orf39 22号染色体开放阅读框39抗体
Cyclin G 周期素G抗体
NCI-H774细胞Crk p38 Crk p38抗体
phospho-Crk p38 (Tyr221) 磷酸化Crk p38抗体
