本品是在室温条件下长期保存用于DNA提取的血液样品的保存液，它通过裂解细胞并高效抑制DNase的活性而达到长期保证DNA分子的完整性。
|
产品名称 |
规格 |
保存 |
货号 |
|
猪流行性腹泻病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 |
50次 |
负20度 |
BH-P63522 |
操作流程:
收集基因信息——>设计引物——>PCR ——>回收目的片段——>与载体连接,取得连接产物 ——> 用感受态细胞做转化 ——>接菌——>阳性克隆鉴定(酶切法或PCR)——>质粒抽提——>质粒测序——>测序结果分析——>克隆信息输入数据库——>质粒实物保存。
组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
使用方法：
一、样品DNA的制备
用自选方法提取细菌样品DNA。注意：DNA纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品DNA，后面的PCR再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备O157:H7标准曲线（以10-10E6这6个10倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。
1. 标记6个离心管，分别为6，5，4，3，2和1号。
2. 用带芯枪头分别加入45 μL纯水（*用带芯枪头，下同）。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用TE缓冲液或纯水10倍梯度稀释到10E7拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至10E7拷贝/μL，建议每次稀释10倍，梯度稀释至10E7拷贝/μL）。
4. 在6号管中加入5 μL 10E7拷贝/μL的O157:H7阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得10E6拷贝/μL的阳性对照。
5. 换枪头，从6号管中取5 μL溶液到5号管中，充分震荡1分钟，得10E5拷贝/μL的阳性对照。
6. 换枪头，从5号管中取5 μL溶液到4号管中，重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。
7. NC管中不加任何阳性对照。
8. 从1-6号管中分别取5 μL和待测样品一起进行定量PCR（见下步），每个样品做3次重复。PCR后得到每个阳性对照稀释样品的荧光PCR Ct值，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。
木糖基转移酶检测试剂盒铬天青S IND(R)-3-(3-氟苯基)-5-羟甲基恶唑烷-2-酮 98%Anti-HRG- Alpha/FITC 荧光素标记抗HRGα抗体IgG
岩藻糖糖基转移酶检测试剂盒铬天青S ≥96%(HPLC)3-羟基喹啉 97%Anti-HRG- Beta/FITC 荧光素标记抗HRGβ抗体IgG
生长因子受体结合蛋白2检测试剂盒环己烷 for HPLC, ≥99.9%6-羟基吲哚 98%Anti-HSL/FITC 荧光素标记荷尔蒙敏感脂肪酸抗体IgG
蛋白酶激活亚基1检测试剂盒磷酸三钙 AR, ≥96.0%2-羟基-6-甲基吡 98%Anti-Phospho-HSL (Ser552)/FITC 荧光素标记磷酸化荷尔蒙敏感脂肪酶抗体IgG
EB病核抗原1检测试剂盒钙镁试剂 Indicator4--1-甲基-1H-吡唑 97%Anti-Phospho-HSL (Ser563) /FITC 荧光素标记磷酸化荷尔蒙敏感脂肪酶抗体IgG
EB病核抗原2检测试剂盒间甲酚 Standard for GC,≥99.7%(GC)4--1H-咪唑 97%Anti-Phospho-HSL (Ser565) /FITC 荧光素标记磷酸化荷尔蒙敏感脂肪酶抗体IgG
EB病衣壳抗原检测试剂盒变色酸 AR4-乙酰氧基吲哚 99%Anti-Phospho-HSL (Ser660)/FITC 荧光素标记磷酸化荷尔蒙敏感脂肪酶抗体IgG
转谷氨酰酶2检测试剂盒环戊酮 GCS,≥99.5% (GC)甲氨基乙盐酸盐 98%Anti-HSP-20/FITC 荧光素标记热休克蛋白-20抗体IgG
TM4SF19检测试剂盒藏花橙G 70%反-8-甲基-6-壬酰氯 97%Anti-HSP22/FITC 荧光素标记热休克蛋白-22抗体IgG
NT-IGFBP-4检测试剂盒藏花橙G Biological stain3-氨基噻吩－2－羧酸甲酯 99%Anti-HSP-27/FITC 荧光素标记HSP-27蛋白抗体IgG
CT-IGFBP-4检测试剂盒结晶紫 Biological stain3-氨基-2-甲氧基吡啶 98%Anti-HSP-47/FITC 荧光素标记热休克蛋白-47蛋白抗体IgG
TNFSF10检测试剂盒结晶紫 ACS, ≥90.0%4-硝基吲哚 98%Anti-HSP-60/FITC 荧光素标记热休克蛋白-60蛋白抗体IgG
TRIM55蛋白检测试剂盒结晶紫 AR5-嘧啶 99%Anti-HSP-70/FITC 荧光素标记HSP-70蛋白抗体IgG
红胰岛素受体酪氨酸蛋白激酶检测试剂盒结晶紫 分析标准品1-(4-吡啶基)哌 97%Anti-HSP75/TRAP-1 /FITC 荧光素标记热休克蛋白-75抗体IgG
二羟基激酶2检测试剂盒胭脂红 AR2,4-二羟基喹啉 97%Anti-OMPC/OMPA/FITC 荧光素标记抗大肠杆菌外膜孔道蛋白C抗体IgG
猪流行性腹泻病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒人泛素交叉反应蛋白 (UCRP)酶联免疫吸附测定试剂盒Human NAC-alpha(Nascent polypeptide-associated complex subunit alpha) ELISA Kit12号染色体开放阅读框29抗体
人α干扰素(IFN-α)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human PARK2(E3 ubiquitin-protein ligase parkin) ELISA Kit12号染色体开放阅读框49抗体
人肌营养不良蛋白关联糖蛋白1(DAG1)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human TRXR3(Thioredoxin reductase 3) ELISA Kit12号染色体开放阅读框50抗体
人透明质酸结合蛋白1(HABP1/C1QBP)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human NT-proCNP(N-Terminal Pro-C-Type Natriuretic Peptide) ELISA Kit12号染色体开放阅读框53抗体
人网状蛋白4(RTN4)酶联免疫吸附测定试剂盒Human MFN2(Mitofusin-2) ELISA Kit12号染色体开放阅读框54抗体
人抗C反应蛋白抗体(Anti-CRP)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human ILDR2(Immunoglobulin-like domain-containing receptor 2) ELISA Kit磷酸化钙调节素抗体
人血管内皮生长因子(VEGF)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human NPY(Neuropeptide Y) ELISA Kit分裂相关蛋白CSTF64抗体
实验注意事项：
1）RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料，不同的样本有不同要求，实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况；
2）客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号；
3）客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4）样本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，*通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量（包括定量和相对定量）和定性分析。
主要服务：DNA或RNA的*定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术：引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR
