操作流程:
收集基因信息——>设计引物——>PCR ——>回收目的片段——>与载体连接,取得连接产物 ——> 用感受态细胞做转化 ——>接菌——>阳性克隆鉴定(酶切法或PCR)——>质粒抽提——>质粒测序——>测序结果分析——>克隆信息输入数据库——>质粒实物保存。
本品是在室温条件下长期保存用于DNA提取的血液样品的保存液，它通过裂解细胞并高效抑制DNase的活性而达到长期保证DNA分子的完整性。
|
产品名称 |
规格 |
保存 |
货号 |
|
白色念珠菌染料法荧光定量PCR试剂盒 |
50次 |
负20度 |
BH-P63592 |
组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
使用方法：
一、样品DNA的制备
用自选方法提取细菌样品DNA。注意：DNA纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品DNA，后面的PCR再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备O157:H7标准曲线（以10-10E6这6个10倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。
1. 标记6个离心管，分别为6，5，4，3，2和1号。
2. 用带芯枪头分别加入45 μL纯水（*用带芯枪头，下同）。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用TE缓冲液或纯水10倍梯度稀释到10E7拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至10E7拷贝/μL，建议每次稀释10倍，梯度稀释至10E7拷贝/μL）。
4. 在6号管中加入5 μL 10E7拷贝/μL的O157:H7阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得10E6拷贝/μL的阳性对照。
5. 换枪头，从6号管中取5 μL溶液到5号管中，充分震荡1分钟，得10E5拷贝/μL的阳性对照。
6. 换枪头，从5号管中取5 μL溶液到4号管中，重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。
7. NC管中不加任何阳性对照。
8. 从1-6号管中分别取5 μL和待测样品一起进行定量PCR（见下步），每个样品做3次重复。PCR后得到每个阳性对照稀释样品的荧光PCR Ct值，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。
实验注意事项：
1）RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料，不同的样本有不同要求，实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况；
2）客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号；
3）客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4）样本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，*通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量（包括定量和相对定量）和定性分析。
主要服务：DNA或RNA的*定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术：引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR
STRUM检测试剂盒N-CBZ-D-氨酸 96%乙酰氧基乙酰氯 97%Anti-Proteasome 20S LMP7 /FITC 荧光素标记低分子质量蛋白7抗体IgG
成纤维生长因子受体1检测试剂盒N-苄氧羰基-L-氨酸 N-羟基琥珀酰亚酯98%3,5-二羟基苯甲酸 97%Anti-Melamine/HRP 辣根过氧化物酶标记抗三聚抗体IgG
血清淀粉样蛋白A3检测试剂盒L-氨酰-L-氨酰-L-氨基酸甲基酯醋酸盐 99%3-羟基苯甲酸乙酯 99%Anti-PS-1/FITC 荧光素标记早老素蛋白-1抗体IgG
活化凝血因子V检测试剂盒BOC-L-Α-氨基吲哚丁酸 97%乙酸 98%Anti-PS-1/FITC 荧光素标记早老素蛋白-1抗体IgG
T-可诱导共激分子配体检测试剂盒(S)-3-氨基-4-苯基丁酸盐酸盐 98%乙酸 70%溶液Anti-PS-1(CT)/FITC 荧光素标记早老素蛋白-1抗体IgG
华支睾吸虫IgM抗体检测试剂盒Z-N-Me-Ala-OH 98%间羟基苯甲酸 98%Anti-Melamine/HRP 辣根过氧化物酶标记三聚单克隆抗体IgG
趋化因子配体27检测试剂盒H-Ala-2-Chlorotrityl Resin 0.3~0.8 mmol/g, 100~200mesh1% DVB3,5-二羟基苯甲酸甲酯 98%Anti-PSAP//FITC 荧光素标记前列腺酸性磷酸酶抗体IgG
3-溴酪氨酸检测试剂盒H-Arg(Pbf)-2-Chlorotrityl Resin 0.3~0.8 mmol/g, 100~200 mesh乙酸钠 98%Anti-prox-1 /FITC 荧光素标记兔抗人、大、小鼠prox-1蛋白抗体IgG
间变性淋巴瘤激酶检测试剂盒H-Asn-2-Chlorotrityl Resin 0.3~0.8 mmol/g, 100~200 mesh3-羧基苯磺酸钠 97%Anti-PSCA /FITC 荧光素标记抗前列腺干抗原抗体IgG
球蛋白抗体检测试剂盒H-Asn(Trt)-2-Chlorotrityl Resin 0.3~0.8 mmol/g, 100~200 mesh草酸 AR，99.5%Anti-PSD93/FITC 荧光素标记突触后密度蛋白93抗体IgG
氨肽酶N检测试剂盒H-Asp(OtBu)-2-Chlorotrityl Resin 0.3~0.8 mmol/g,100~200 mesh草酸 CP，99.5%Anti-Phospho-PSD93 (Tyr340) /FITC 荧光素标记磷酸化突触后密度蛋白93抗体IgG
内皮微粒水平检测试剂盒Fmoc-D-Ala-Wang resin 100-200mesh, Substitution0.2-1.0mmol/g草酸 GR，99.8%Anti-PSD-95/FITC 荧光素标记突触后密度蛋白95抗体IgG
神经酰酶检测试剂盒Fmoc-Arg(Pbf)-Wang resin 100-200 mesh, 1%DVB草酸 SPAnti-P-selectin/CD62p /FITC 荧光素标记P选择素抗体IgG
前脑钠素检测试剂盒Fmoc-Asn(Trt)-Wang resin 100-200 mesh, 1%DVB草酸 99.99%
紧密连接蛋白2检测试剂盒Fmoc-Asp(OtBu)-Wang resin 100-200 mesh, 1%DVB草酸 ACSAnti-PSMD9/Bridge-1 /FITC 荧光素标记蛋白酶调解因子9抗体IgG
白色念珠菌染料法荧光定量PCR试剂盒小鼠原纤维蛋白1(FBN1)酶联免疫吸附测定试剂盒Human EFNA5(Ephrin A5) ELISA Kit皮肤T淋巴瘤相关抗原4抗体
小鼠纤维蛋白原α(FGA)酶联免疫吸附测定试剂盒Human ELA2B(Elastase 2B) ELISA Kit膜蛋白CLDND2抗体
小鼠纤维蛋白原β(FGB)酶联免疫吸附测定试剂盒Human Des(Desmin) ELISA Kit含半胱氨酸和组氨酸丰富域蛋白1抗体
小鼠血纤蛋白原降解产物(FDP)酶联免疫吸附测定试剂盒Human ELA3B(Elastase 3B) ELISA Kit猪圆环病Ⅱ型衣壳蛋白
小鼠血纤蛋白原样蛋白2(FGL2)酶联免疫吸附测定试剂盒Human DHEA-S(Dehydroepiandrosterone Sulfate) ELISA Kit抗菌肽CAMP抗体
小鼠血纤蛋白原(Fbg)酶联免疫吸附测定试剂盒Human DPD(Deoxypyridinoline) ELISA Kit卷曲螺旋结构域蛋白134抗体
小鼠成纤维生长因子7(FGF7)酶联免疫吸附测定试剂盒Human DPT(Dermatopontin) ELISA Kit卷曲螺旋结构域蛋白69抗体
