操作流程:
产品名称
规格
保存
货号
禽流感病毒H7N2亚型检测试剂盒、荧光PCR法
50T
详见说明书
BH-P63733
组成及试剂配制:
1、酶标板:一块(96孔)
2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液:1×20ml。
4、 检测稀释液A:1×10ml。
5、 检测稀释液B:1×10ml。
使用方法:
一、样品DNA的制备
用自选方法提取细菌样品DNA。注意:DNA纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品DNA,后面的PCR再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备O157:H7标准曲线(以10-10E6这6个10倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体病毒做阳性对照,只提供没有传染性的、可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。
1. 标记6个离心管,分别为6,5,4,3,2和1号。
2. 用带芯枪头分别加入45 μL纯水(*用带芯枪头,下同)。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用TE缓冲液或纯水10倍梯度稀释到10E7拷贝/μL(注:请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至10E7拷贝/μL,建议每次稀释10倍,梯度稀释至10E7拷贝/μL)。
4. 在6号管中加入5 μL 10E7拷贝/μL的O157:H7阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得10E6拷贝/μL的阳性对照。
5. 换枪头,从6号管中取5 μL溶液到5号管中,充分震荡1分钟,得10E5拷贝/μL的阳性对照。
6. 换枪头,从5号管中取5 μL溶液到4号管中,重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。
7. NC管中不加任何阳性对照。
8. 从1-6号管中分别取5 μL和待测样品一起进行定量PCR(见下步),每个样品做3次重复。PCR后得到每个阳性对照稀释样品的荧光PCR Ct值,并以之为纵轴,以浓度的对数值为横轴,绘制标准曲线。
实验注意事项:
1)RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料,不同的样本有不同要求,实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况;
2)客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号;
3)客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4)样本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,*通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类,探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加,非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量(包括定量和相对定量)和定性分析。
主要服务:DNA或RNA的*定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术:引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR
苯氨酸检测试剂盒苯酚 AR盐酸倍他司汀 99%ROCK2 (Rho-associated coiled-coil containing protein kinase 2) Rho相关蛋白激酶2抗原
表皮生长因子检测试剂盒苯酚 ACS2-氯苄 99%RXR Alpha(retinoid-X receptor alpha) 核受体RXRα抗原
谷转氨酶检测试剂盒苯酚 用于分子生物学,≥99.5%6-氯-7-氮杂嘌呤 98%S6PDH(NADP sorbitol-6-phosphate dehydrogenase) 6-磷酸山梨脱氢酶抗原
检测试剂盒1,2- standard for GC, ≥99.5% (GC)乙酸乙酯 98%S100B S100B蛋白抗原
二检测试剂盒1,2- AR,99%二乙氧基乙酸乙酯 97%S100B(S100 calcium binding protein B)(human, mouse, rat, bovine, Rabbit, chicken) S100B蛋白多肽
酮酸激酶检测试剂盒1,2- CP,98%3-甲酰基-2-酸乙酯 97%S-100A1 (S100 calcium-binding protein A1) 钙结合蛋白S100A1抗原
酮酸脱氢酶检测试剂盒1,2- GR,99.5%4-噁唑羧酸乙酯 97%SATB1(special AT-rich sequence binding protein) 核基质结合区结合蛋白1抗原
酮酸脱氢酶E1检测试剂盒1,2- ACS乙二水杨酸酯 98%SCF (Stem Cell Factor) 干生长因子抗原
补体蛋白3检测试剂盒1,2- 分析标准品乙酸乙酯,甲苯溶液 50%甲苯溶液SCN9A/NAV1.7(Sodium channel protein type 9 subunit alpha) 电压开启的钠离子通道SCN9A抗原
补体蛋白4检测试剂盒氢氧化 AR,90%羟基乙酰 98%CXCL14(CXC-chemokine ligand 16) CXC趋化因子14抗原
补体片段3c检测试剂盒化 CP,98.0%乙酸 98%CXCL16 peptide CXC趋化因子16抗原
补体片断3a检测试剂盒邻苯二甲酸酐 CP乙酸甲酯 98%Sema3A (semaphorin 3A) 臂板蛋白3A(多肽)
补体片断5a检测试剂盒间苯二酚 AR二甲氧基乙酸甲酯 97%Sema3F (semaphorin 3F) 臂板蛋白3F抗原
不对称二甲基精氨酸检测试剂盒间苯二酚 ACS, 99.0-100.5% 3, 3-二甲氧基酸甲酯 97%SFRP1(Secreted frizzled related protein 1) 分泌型卷曲相关蛋白1抗原
层粘连蛋白检测试剂盒氢氧化钠 CP,95%3-硝基水杨酸甲酯 98%SGLT1(sodium-glucose cotransporter1) 钠-葡萄糖共转运载体1抗原
大鼠连锁蛋白/连环素α1(CTNNa1)酶联免疫吸附测定试剂盒Human NDP(Norrin) ELISA KitCaspase 激活的脱氧核糖核酸酶抗体
大鼠β连接素(CTNNb)酶联免疫吸附测定试剂盒Human QDPR(Dihydropteridine reductase) ELISA Kit死亡效应结构域蛋白1抗体
大鼠组织蛋白酶D(CTSD)酶联免疫吸附测定试剂盒Human HMGA1(High mobility group protein HMG-I/HMG-Y) ELISA Kit死亡效应结构域蛋白2抗体
大鼠组织蛋白酶K(CTSK)酶联免疫吸附测定试剂盒Human MMP19(Matrix
大鼠组织蛋白酶L(CTSL)酶联免疫吸附测定试剂盒Human LARP7(La-related protein 7) ELISA Kit死亡相关蛋白6/Fas死亡区相关蛋白抗体
大鼠尾型同源盒转录因子2(CDX2)酶联免疫吸附测定试剂盒Human DDX42(ATP-dependent RNA helicase DDX42) ELISA Kit酶动力蛋白2抗体
收集基因信息——>设计引物——>PCR ——>回收目的片段——>与载体连接,取得连接产物 ——> 用感受态细胞做转化 ——>接菌——>阳性克隆鉴定(酶切法或PCR)——>质粒抽提——>质粒测序——>测序结果分析——>克隆信息输入数据库——>质粒实物保存。
本品是在室温条件下长期保存用于DNA提取的血液样品的保存液,它通过裂解细胞并高效抑制DNase的活性而达到长期保证DNA分子的完整性。
禽流感病毒H7N2亚型检测试剂盒、荧光PCR法大鼠内皮素1(ET-1)酶联免疫吸附测定试剂盒Human SULT1A1(Sulfotransferase 1A1) ELISA Kit间粘附分子非整合素蛋白3抗体