实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，*通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量（包括定量和相对定量）和定性分析。
主要服务：DNA或RNA的定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术：引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR
产品名称
规格
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货号
星状病毒和札如病毒检测试剂盒、荧光PCR法
50T
详见说明书
BH-P63875
组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
使用方法：
一、样品DNA的制备
用自选方法提取细菌样品DNA。注意：DNA纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品DNA，后面的PCR再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备O157:H7标准曲线（以10-10E6这6个10倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。
1. 标记6个离心管，分别为6，5，4，3，2和1号。
2. 用带芯枪头分别加入45 μL纯水（*用带芯枪头，下同）。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用TE缓冲液或纯水10倍梯度稀释到10E7拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至10E7拷贝/μL，建议每次稀释10倍，梯度稀释至10E7拷贝/μL）。
4. 在6号管中加入5 μL 10E7拷贝/μL的O157:H7阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得10E6拷贝/μL的阳性对照。
5. 换枪头，从6号管中取5 μL溶液到5号管中，充分震荡1分钟，得10E5拷贝/μL的阳性对照。
6. 换枪头，从5号管中取5 μL溶液到4号管中，重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。
7. NC管中不加任何阳性对照。
8. 从1-6号管中分别取5 μL和待测样品一起进行定量PCR（见下步），每个样品做3次重复。PCR后得到每个阳性对照稀释样品的荧光PCR Ct值，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。
实验注意事项：
1）RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料，不同的样本有不同要求，实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况；
2）客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号；
3）客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4）样本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
操作流程:
白介素28A检测试剂盒2,4-噻唑烷二酮 99%3-氟苯甲酰氯 98%AP36(Human Apelin 36) ELISA Kit 人Apelin 36
巨噬炎性蛋白1γ检测试剂盒氯化金(III) 水合物 Au ≥48%间苯二甲酰氯 99%Tn-T(Human Troponin T) ELISA Kit 人肌钙蛋白T
抗甲状腺过氧化物酶抗体检测试剂盒三氯化金水溶液 Au 23.5～23.8%对甲酰氯 98%ES-Ab(Human anti-Endostatin antibody) ELISA Kit 人血管内皮抑素抗体
N-甲基-D-天冬氨酸受体检测试剂盒金丝/金粉 99.99%对苯二甲酰氯 99%Agtr I a(Human angiotensin II receptor type I a) ELISA Kit 人血管紧张素Ⅱ受体Ⅰa型
跨膜蛋白119检测试剂盒乙酸银 AR,99.5%苯乙酰氯 98%ANGPTL3(Human angiopoietin-like protein 3) ELISA Kit 人血管生成素样蛋白3
DNA去甲基化转移酶检测试剂盒碳酸银 AR,99.0%4'-叔丁基-4-氯丁酰苯 98%Alpha Actin(Human Alpha-Actin) ELISA Kit 人α肌动蛋白
β葡萄糖酸苷酶检测试剂盒氧化银 AR,99.7% 维生素K1 98%ANKRD1(Human cardiac ankyrin repeat domain 1) ELISA Kit 人心肌锚蛋白重复域1
组蛋白去甲基化转移酶检测试剂盒硝酸银 AR,99.8%5-己炔-1- 96%LEPR(Human Leptin Receptor) ELISA Kit 人瘦素受体
过氧化物酶体增殖物激活受体δ 检测试剂盒硝酸银 99.99%
Krueppel样因子6检测试剂盒氧化银 99.99%
胰岛素受体β检测试剂盒氟化银(I) 99%间氯苯甲酰氯 97%ANG-4(Human Angiopoietin 4) ELISA Kit 人血管生成素4
CD86分子检测试剂盒叔丁 AR,98%邻氯苯甲酰氯 98%sMHC-1(Human soluble myosin heavy chain 1) ELISA Kit 人可溶性肌球蛋白重链1
成纤维生长因子7检测试剂盒叔丁 99%二苯烷 CP，98%HSF-1(Human Heat Shock Factor 1) ELISA Kit 人热休克因子1
Apelin检测试剂盒叔丁 Standard for GC, ≥99.5% (GC)二苯烷 99%VPI(Human vasopeptidase inhibitors) ELISA Kit 人血管活性肽酶抑制剂
蛋白激酶B2检测试剂盒叔丁 99.5%,重蒸馏对甲酰氯 98%CMLC-1(Human Cardiac myosin-light chains 1) ELISA Kit 人心肌肌凝蛋白轻链1
大鼠5羟基二十烷四烯酸(5-HETE)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human CMAS (N-acylneuraminate cytidylyltransferase) ELISA KITFAM50B蛋白抗体
大鼠钙卫蛋白(CALPRO)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human CCNYL3 (Putative cyclin-Y-like protein 3) ELISA KIT形成素2抗体（成蛋白）
大鼠膜联蛋白A5(ANXA5)酶联免疫吸附测定试剂盒Human CDK16 (Cyclin-dependent kinase 16) ELISA KIT脂阀结构蛋白1抗体
大鼠血小板膜糖蛋白Ib-IX-V(GPIb-IX-V)酶联免疫吸附测定试剂盒Human CAND1 (Cullin-associated NEDD8-dissociated protein 1) ELISA KIT成纤维生长因子17抗体
大鼠清道夫受体B类成员1(SCARB1)酶联免疫吸附测定试剂盒Human CCNYL2 (Cyclin-Y-like protein 2) ELISA KIT成纤维生长因子23抗体
大鼠白介素25(IL-25)酶联免疫吸附测定试剂盒Human CWF19L1 (CWF19-like protein 1) ELISA KIT成纤维生长因子20抗体
收集基因信息——>设计引物——>PCR ——>回收目的片段——>与载体连接,取得连接产物 ——> 用感受态细胞做转化 ——>接菌——>阳性克隆鉴定(酶切法或PCR)——>质粒抽提——>质粒测序——>测序结果分析——>克隆信息输入数据库——>质粒实物保存。
本品是在室温条件下长期保存用于DNA提取的血液样品的保存液，它通过裂解细胞并高效抑制DNase的活性而达到长期保证DNA分子的完整性。
星状病毒和札如病毒检测试剂盒、荧光PCR法大鼠垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP)酶联免疫吸附测定试剂盒Human CCNYL1 (Cyclin-Y-like protein 1) ELISA KIT微管动力调节蛋白FAM82A抗体
