实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，*通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量（包括定量和相对定量）和定性分析。
主要服务：DNA或RNA的定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术：引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR
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产品名称 |
规格 |
保存 |
货号 |
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弓形虫检测试剂盒、荧光PCR法 |
50T |
详见说明书 |
BH-P63995 |
组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
使用方法：
一、样品DNA的制备
用自选方法提取细菌样品DNA。注意：DNA纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品DNA，后面的PCR再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备O157:H7标准曲线（以10-10E6这6个10倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。
1. 标记6个离心管，分别为6，5，4，3，2和1号。
2. 用带芯枪头分别加入45 μL纯水（*用带芯枪头，下同）。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用TE缓冲液或纯水10倍梯度稀释到10E7拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至10E7拷贝/μL，建议每次稀释10倍，梯度稀释至10E7拷贝/μL）。
4. 在6号管中加入5 μL 10E7拷贝/μL的O157:H7阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得10E6拷贝/μL的阳性对照。
5. 换枪头，从6号管中取5 μL溶液到5号管中，充分震荡1分钟，得10E5拷贝/μL的阳性对照。
6. 换枪头，从5号管中取5 μL溶液到4号管中，重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。
7. NC管中不加任何阳性对照。
8. 从1-6号管中分别取5 μL和待测样品一起进行定量PCR（见下步），每个样品做3次重复。PCR后得到每个阳性对照稀释样品的荧光PCR Ct值，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。
实验注意事项：
1）RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料，不同的样本有不同要求，实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况；
2）客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号；
3）客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4）样本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
操作流程:
收集基因信息——>设计引物——>PCR ——>回收目的片段——>与载体连接,取得连接产物 ——> 用感受态细胞做转化 ——>接菌——>阳性克隆鉴定(酶切法或PCR)——>质粒抽提——>质粒测序——>测序结果分析——>克隆信息输入数据库——>质粒实物保存。
本品是在室温条件下长期保存用于DNA提取的血液样品的保存液，它通过裂解细胞并高效抑制DNase的活性而达到长期保证DNA分子的完整性。
P53蛋白检测试剂盒重铬酸 99.99%
N-甲基-D-天门冬氨酸（NMDA）受体亚单位NR2B检测试剂盒重铬酸 ACS, ≥99.0%苯甲 CP,98%Plant growth hormone,GH ELISA Kit 植物生长激素
戊肝抗原检测试剂盒重铬酸 分析标准品，99.998%苄 AR,99.00%Plant phosphatidic acid,PA ELISA Kit 植物凝脂酸
兰尼定受体1检测试剂盒重铬酸标准溶液0.1mol/L苯甲 CP,>98%(GC)Plant Indole-3-acetic acid ,IAA ELISA Kit 植物吲哚乙酸
去乙酰化酶检测试剂盒重铬酸标准溶液 1/24mol/L(0.25N) >99.0%(GC)Wheat germ agglutinin,WGA ELISA Kit 麦胚凝集素/凝集蛋白
p-Bad检测试剂盒重铬酸标准溶液 1/60mol/L(0.1N) ARUlex Europaeus agglutinin,UEA ELISA Kit 荆豆凝集素
嗜铬瘤检测试剂盒过硫酸 AR,99.5%苯甲酸 AR,99.5% Sophora japonica agglutinin,SJA ELISA Kit 槐凝集素
模型脑组织耐药蛋白癌耐药蛋白检测试剂盒过硫酸 CP,99.0%1-氯-1-苯乙烷 97%Peanut agglutinin,PNA ELISA Kit 花生凝集素
有机阴离子转运肽检测试剂盒过硫酸 ACS, ≥99.0% (RT) 肉桂酸 CP，98%Soybean agglutinin,SBA ELISA Kit 大豆凝集素
OAYP1B1检测试剂盒过硫酸 99.99%
甲状旁腺激素检测试剂盒硫酸 AR,98.5%苯甲酸 AR,99.0%Lens culinaris agglutinin,LCA ELISA Kit 扁豆凝集素
CD20分子检测试剂盒硫酸 CP,98%苯甲酸苯酯 99%Ricinus communis agglutinin,RCA ELISA Kit 蓖麻凝集素
维生素D检测试剂盒硫酸 GR,99%苯甲酸钠 AR,99.5%Pisum sativum agglutinin,PSA ELISA Kit 豌豆凝集素
羟基类固脱氢酶检测试剂盒硫酸 ACS苯甲酸钠 药用级Dolichos bifows agglutinin,DBA ELISA Kit 双花扁豆凝集素
一氧化氮合成酶检测试剂盒硫酸标准溶液 0.1000mol/L(0.1N)邻甲苯甲酸 98%Plant calmodulin,CAM ELISA Kit 植物钙调素
弓形虫检测试剂盒、荧光PCR法猪内分泌腺来源的血管内皮生长因子(EG-VEGF)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human TSPAN1 ELISA Kit生长因子受体结合蛋白2相关接头蛋白抗体
猪线粒体肌酸激酶1A(CKMT1A)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human TSPAN11 ELISA Kit生长因子受体结合蛋白14抗体
猪内皮素1(ET-1)酶联免疫吸附测定试剂盒Human TSPAN10 ELISA KitHBeAg结合蛋白4/甘油激酶抗体
猪趋化素样因子家族成员5(CKLFSF5)酶联免疫吸附测定试剂盒Human TSPAN2 ELISA Kit甘酸-N-酰基转移酶样2抗体
猪低氧上调节因子1(HYOU1)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human SLC26A4(Pendrin) ELISA Kit磷脂酰基蛋白聚糖2抗体
猪Ⅲ型前胶原羧基端原肽(PⅢCP)酶联免疫吸附测定试剂盒Human TSPAN3 ELISA Kit氧化还原酶GlyR1/核蛋白60抗体
猪前胶原C端蛋白酶增强子1(PCPE1)酶联免疫吸附测定试剂盒Human PPARGC1A(Peroxisome prolifeRator-activated receptor gamma coactivator 1-alpha) ELISA Kit神经鞘脂激活蛋白3抗体
