操作流程:
收集基因信息——>设计引物——>PCR ——>回收目的片段——>与载体连接,取得连接产物 ——> 用感受态细胞做转化 ——>接菌——>阳性克隆鉴定(酶切法或PCR)——>质粒抽提——>质粒测序——>测序结果分析——>克隆信息输入数据库——>质粒实物保存。
本品是在室温条件下长期保存用于DNA提取的血液样品的保存液，它通过裂解细胞并高效抑制DNase的活性而达到长期保证DNA分子的完整性。
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产品名称 |
规格 |
保存 |
货号 |
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牛副结核分枝杆菌检测试剂盒、荧光PCR法 |
50T |
详见说明书 |
BH-P64049 |
组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
使用方法：
一、样品DNA的制备
用自选方法提取细菌样品DNA。注意：DNA纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品DNA，后面的PCR再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备O157:H7标准曲线（以10-10E6这6个10倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。
1. 标记6个离心管，分别为6，5，4，3，2和1号。
2. 用带芯枪头分别加入45 μL纯水（*用带芯枪头，下同）。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用TE缓冲液或纯水10倍梯度稀释到10E7拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至10E7拷贝/μL，建议每次稀释10倍，梯度稀释至10E7拷贝/μL）。
4. 在6号管中加入5 μL 10E7拷贝/μL的O157:H7阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得10E6拷贝/μL的阳性对照。
5. 换枪头，从6号管中取5 μL溶液到5号管中，充分震荡1分钟，得10E5拷贝/μL的阳性对照。
6. 换枪头，从5号管中取5 μL溶液到4号管中，重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。
7. NC管中不加任何阳性对照。
8. 从1-6号管中分别取5 μL和待测样品一起进行定量PCR（见下步），每个样品做3次重复。PCR后得到每个阳性对照稀释样品的荧光PCR Ct值，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。
实验注意事项：
1）RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料，不同的样本有不同要求，实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况；
2）客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号；
3）客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4）样本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，*通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量（包括定量和相对定量）和定性分析。
主要服务：DNA或RNA的*定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术：引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR
磷脂转移蛋白检测试剂盒戊唑 分析标准品，99%琥珀酸二甲酯 AR，99%Anti-A Raf/ARAF/FITC 荧光素标记A-Raf抗体IgG
高密度脂蛋白载脂蛋白A1检测试剂盒苯磺隆 分析标准品，95%二乙二丁醋酸酯 98%Anti-Phospho-A Raf (Ser299) /FITC 荧光素标记磷酸化A-Raf抗体IgG
高密度脂蛋白血清淀粉样蛋白A检测试剂盒氮酮 97%二异丁基酮 异构体混合物，97%Anti-Phospho-A Raf (Tyr301/302) /FITC 荧光素标记磷酸化A-Raf抗体IgG
高密度脂蛋白对氧磷酶-1检测试剂盒氮酮 药用级正己烷 AR，97%Anti-JAM1/CD321/FITC 荧光素标记连接粘附分子1抗体IgG
对氧磷酶-1检测试剂盒富马酸二甲酯 97%异丁酸异丁酯 98%Anti-cRaf/Raf1(c-raf 1) /FITC 荧光素标记抗cRaf/Raf1抗体IgG
神经生长因子1检测试剂盒反二酸 CP，99.0%甲基环己烷 Standard for GC, ≥99.8% (GC)Anti-CREB-1/FITC 荧光素标记环腺苷酸应答元件结合蛋白抗体IgG
甲状腺素检测试剂盒反二酸 99.5%甲基环己烷 99%Anti-P-CREB-1/FITC 荧光素标记磷酸化环腺苷酸应答元件结合蛋白抗体IgG
神经胶质成熟因子β检测试剂盒反二酸 ≥99%, FCC甲基环己烷 for HPLC,≥99%Anti-C-REL/FITC 荧光素标记淋巴衍生C-型凝集素抗体IgG
粘蛋白6检测试剂盒反二酸 for cell culture，≥99%甲基环己烷 光谱级,≥99%Anti-CRF/FITC 荧光素标记促肾上腺皮质激素释放因子IgG
三叶因子1检测试剂盒1，1-二氟乙烷 99.5%甲基异丁(MIBC) 99%Anti-CRF/CRH /FITC 荧光素标记促肾上腺皮质激素释放因子抗体IgG
三叶因子2检测试剂盒一氟三氯 99.8%异丁酰乙酸甲酯 98%Anti-CRHR1/CRFR1/FITC 荧光素标记促肾上腺皮质释放激素受体1抗体IgG
布鲁顿酪氨酸激酶检测试剂盒惠普原装电脑甲基异丁酮 for HPLC, ≥99.5%Anti-CRHR2/CRFR2/FITC 荧光素标记促肾上腺皮质释放激素受体2抗体IgG
3,4-二羟基苯基二检测试剂盒中性氧化铝 100-200目甲基异丁酮 ACS, ≥98.5%Anti-Cripto-1/FITC 荧光素标记表皮生长因子相关肽抗体IgG
肌生成素检测试剂盒中性氧化铝 200-300目氨酸甲酯 99%Anti-Cripto-1/FITC 荧光素标记畸胎瘤衍化生长因子抗体(表皮生长因子相关肽)C端IgG
溶血磷脂酰胆碱检测试剂盒碱性氧化铝 100-200目异戊 ACS，98.5%Anti-CRLR/CALCRL/FITC 荧光素标记降钙素受体样蛋白抗体IgG
牛副结核分枝杆菌检测试剂盒、荧光PCR法猪胶质系来源的神经营养因子(GDNF)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human TARS2 ELISA Kit蛋白偶联受体55抗体
猪表皮生长因子受体(EGFR)酶联免疫吸附测定试剂盒Human TARSL2 ELISA Kit生长抑制DNA损伤基因45γ抗体 GADD45γ
猪骨成型蛋白3(BMP-3)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human TAF1L ELISA Kit生长停滞特异性蛋白2家族3抗体
猪甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶(MASP)酶联免疫吸附测定试剂盒Human TAF1 ELISA Kit颗粒酶K抗体
猪甲酰甲硫氨酸(fMet)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human TAF3 ELISA Kit甘油磷酸二酯酶磷酸结构域5抗体
猪巨噬移动抑制因子(MIF)酶联免疫吸附测定试剂盒Human TAF6L ELISA Kitγ谷氨酰转移酶抗体
猪多配体聚糖1(SDC1)酶联免疫吸附测定试剂盒Human TAF5L ELISA KitG1氨基丁酸A型受体α1抗体
