操作流程:
收集基因信息——>设计引物——>PCR ——>回收目的片段——>与载体连接,取得连接产物 ——> 用感受态细胞做转化 ——>接菌——>阳性克隆鉴定(酶切法或PCR)——>质粒抽提——>质粒测序——>测序结果分析——>克隆信息输入数据库——>质粒实物保存。
本品是在室温条件下长期保存用于DNA提取的血液样品的保存液，它通过裂解细胞并高效抑制DNase的活性而达到长期保证DNA分子的完整性。
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产品名称 |
规格 |
保存 |
货号 |
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转基因玉米品系Bt11检测试剂盒、PCR-荧光探针法 |
48T 0.1PCR管/48T 0.2PCR管 |
详见说明书 |
BH-P64143 |
组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
使用方法：
一、样品DNA的制备
用自选方法提取细菌样品DNA。注意：DNA纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品DNA，后面的PCR再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备O157:H7标准曲线（以10-10E6这6个10倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。
1. 标记6个离心管，分别为6，5，4，3，2和1号。
2. 用带芯枪头分别加入45 μL纯水（*用带芯枪头，下同）。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用TE缓冲液或纯水10倍梯度稀释到10E7拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至10E7拷贝/μL，建议每次稀释10倍，梯度稀释至10E7拷贝/μL）。
4. 在6号管中加入5 μL 10E7拷贝/μL的O157:H7阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得10E6拷贝/μL的阳性对照。
5. 换枪头，从6号管中取5 μL溶液到5号管中，充分震荡1分钟，得10E5拷贝/μL的阳性对照。
6. 换枪头，从5号管中取5 μL溶液到4号管中，重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。
7. NC管中不加任何阳性对照。
8. 从1-6号管中分别取5 μL和待测样品一起进行定量PCR（见下步），每个样品做3次重复。PCR后得到每个阳性对照稀释样品的荧光PCR Ct值，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。
实验注意事项：
1）RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料，不同的样本有不同要求，实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况；
2）客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号；
3）客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4）样本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，*通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量（包括定量和相对定量）和定性分析。
主要服务：DNA或RNA的*定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术：引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR
H5N1检测试剂盒3-吡啶乙酸盐酸盐 99%4,5-二氟-2-甲酸 98%Anti-p-Nrf2/FITC 荧光素标记磷酸化核因子2相关因子2抗体IgG
脂肪酸结合蛋白检测试剂盒锌粉 AR,99%3-氟-4-甲酸 98%Anti-Nrn1/Cpg15/FITC 荧光素标记转化神经突起蛋白抗体IgG
外脂肪酸结合蛋白检测试剂盒对乙酰氨基苯酚 AR,99.0%3-氟-4-甲酸 98% Anti-CD303/BDCA-2/CLEC4C 荧光素标记C型凝集素结构域家族4成员C抗体IgG
α3谷胱甘肽S转移酶检测试剂盒十二烷基苯磺酸 90%4-氟-3- 98%Anti-CD304/BDCA-4/NRP-1 /FITC 荧光素标记神经纤毛蛋白-1抗体IgG
胰高血糖素样肽1检测试剂盒L-抗坏血酸棕榈酸酯 99%4-甲基-3- 98%Anti-NRP-2/FITC 荧光素标记神经纤毛蛋白-2抗体IgG
可溶性白介素2受体检测试剂盒L-抗坏血酸棕榈酸酯 USP级2,4,6-三氯苯甲酸 98%Anti-NEDD4L/NEDD4-2/FITC 荧光素标记泛素连接酶NEDD4-2抗体IgG
同型半胱氨酸检测试剂盒联苯 分析标准品,≥98%(HPLC)5-溴-5-硝基-1,3-二恶烷 98%Anti-Phospho-NEDD4L (Ser342) /FITC 荧光素标记磷酸化泛素连接酶NEDD4-2抗体IgG
卵清蛋白检测试剂盒联苯 AR，95%溴乙酰溴 97%Anti-NRSF/REST/FITC 荧光素标记神经元抑制蛋白抗体IgG
谷转氨酶检测试剂盒联苯标准溶液 1000μg/ml,溶剂：甲桂油 FCCAnti-NSBP1/FITC 荧光素标记核小体结合蛋白1抗体IgG
谷草转氨酶检测试剂盒盐酸联苯 AR,99.0%硫双二氯酚 97%Anti-NSE/FITC 荧光素标记神经元特异性烯化酶抗体IgG
滑液囊支原体抗体检测试剂盒α-酮戊二酸 98%磺醋酰 分析标准品Anti-Ntn1/FITC 荧光素标记轴突导向因子1抗体IgG
球蛋白检测试剂盒美海屈林萘二磺酸盐 98%磺醋酰 98%Anti-NT-3/FITC 荧光素标记神经营养因子-3抗体IgG
溶血酶检测试剂盒1,2,4-三甲氧基苯 97%3-巯基酸甲酯 98%Anti-NT-4/NT-5 /FITC 荧光素标记神经生长因子4/5抗体IgG
碱性磷酸酶检测试剂盒2,4,5-三甲氧基苯甲 98%邻甲基 99%Anti-NTCP/FITC 荧光素标记钠离子/牛磺胆酸共转运蛋白IgG
肿瘤坏死因子受体1检测试剂盒2,4,5-三甲氧基苯甲酸 99%3-乙酰氧基-2-丁酮 98%Anti-NTN/FITC 荧光素标记神经生长因子抗体IgG
转基因玉米品系Bt11检测试剂盒、PCR-荧光探针法猪糖基化依赖的黏附分子(GlyCAM1)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human SARS2(Serine–tRNA ligase, mitochondrial ) ELISA Kit抑制素A/Inhibin α抗体
猪二级淋巴组织趋化因子(SLC/CCL21)酶联免疫吸附测定试剂盒Human SAMD4B ELISA Kit胰岛素基因增强结合蛋白1/2抗体
猪丝氨酸蛋白酶33(PRSS33)酶联免疫吸附测定试剂盒Human SAMD9 ELISA Kit磷酸化白介素-1受体相关激酶1抗体
猪蛋白激酶抑制剂α(PKIα )酶联免疫吸附测定试剂盒Human MVP(Major vault protein) ELISA Kit磷酸化白介素-1受体相关激酶1抗体
猪孕酮和adipoQ受体家族成员Ⅶ(PAQR7)酶联免疫吸附测定试剂盒Human S100A3 ELISA Kit磷酸化白介素-1受体相关激酶1抗体
猪谷胱甘肽S转移酶α5(GSTα5)酶联免疫吸附测定试剂盒Human SAMD9L ELISA Kit干扰素调节因子3
猪氨酸氨肽酶(AAP)酶联免疫吸附测定试剂盒Human SAMHD1 ELISA Kit磷酸化干扰素调节因子3
