实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，*通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量（包括定量和相对定量）和定性分析。
主要服务：DNA或RNA的定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术：引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR
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产品名称 |
规格 |
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货号 |
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转基因玉米品系DAS-40278-9检测试剂盒、PCR-荧光探针法 |
48T 0.1PCR管/48T 0.2PCR管 |
详见说明书 |
BH-P64145 |
组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
使用方法：
一、样品DNA的制备
用自选方法提取细菌样品DNA。注意：DNA纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品DNA，后面的PCR再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备O157:H7标准曲线（以10-10E6这6个10倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。
1. 标记6个离心管，分别为6，5，4，3，2和1号。
2. 用带芯枪头分别加入45 μL纯水（*用带芯枪头，下同）。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用TE缓冲液或纯水10倍梯度稀释到10E7拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至10E7拷贝/μL，建议每次稀释10倍，梯度稀释至10E7拷贝/μL）。
4. 在6号管中加入5 μL 10E7拷贝/μL的O157:H7阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得10E6拷贝/μL的阳性对照。
5. 换枪头，从6号管中取5 μL溶液到5号管中，充分震荡1分钟，得10E5拷贝/μL的阳性对照。
6. 换枪头，从5号管中取5 μL溶液到4号管中，重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。
7. NC管中不加任何阳性对照。
8. 从1-6号管中分别取5 μL和待测样品一起进行定量PCR（见下步），每个样品做3次重复。PCR后得到每个阳性对照稀释样品的荧光PCR Ct值，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。
实验注意事项：
1）RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料，不同的样本有不同要求，实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况；
2）客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号；
3）客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4）样本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
操作流程:
收集基因信息——>设计引物——>PCR ——>回收目的片段——>与载体连接,取得连接产物 ——> 用感受态细胞做转化 ——>接菌——>阳性克隆鉴定(酶切法或PCR)——>质粒抽提——>质粒测序——>测序结果分析——>克隆信息输入数据库——>质粒实物保存。
本品是在室温条件下长期保存用于DNA提取的血液样品的保存液，它通过裂解细胞并高效抑制DNase的活性而达到长期保证DNA分子的完整性。
支原体检测试剂盒阿拉丁中文综合目录 中文3-溴酮酸乙酯 90%Anti-Omgp /FITC 荧光素标记少突髓磷脂糖蛋白抗体IgG
白痢鸡伤寒抗体检测试剂盒阿拉丁中文综合目录 英文镁屑 99.9%
副嗜血杆菌检测试剂盒硫化铵溶液 ACS,22.0-24.0%植酸溶液 50%溶液Anti-OPCML /FITC 荧光素标记阿片样物质结合蛋白/粘附分子样蛋白抗体IgG
P53蛋白检测试剂盒高氯酸镁，无水 AR甲酸叶酯 97%Anti-mu Opioid receptor/FITC 荧光素标记µ-型阿片受体抗体IgG
H9型病检测试剂盒无水硫酸钙 AR,97.0%甲酸叶酯 97%Anti-Phospho-delta Opioid Receptor (Ser363) /FITC 荧光素标记磷酸化D型阿片受体抗体IgG
伤寒沙门氏菌抗体检测试剂盒铝 CP乳酸叶酯 98%Anti-Phospho-mu Opioid Receptor (Ser375) /FITC 荧光素标记磷酸化µ-型阿片受体抗体IgG
副伤寒沙门氏菌抗体检测试剂盒磷酸铵 CP,95.0%乌苯美司 纯级，>99%Anti-OPG /FITC 荧光素标记骨保护蛋白/护骨素抗体IgG
禽呼肠孤病检测试剂盒磷酸铵 AR,98.0%5-氯-2- 99%Anti-OPGL/RANKL/CD254 /FITC 荧光素标记骨保护蛋白配体抗体IgG
禽痘病检测试剂盒高氯酸铵 ARS-甲基-L-半胱氨酸亚砜 99%Anti-RANK/TNFRSF11A/CD265/FITC 荧光素标记核转录因子NF-κB受体抗体IgG
禽脑脊髓炎病检测试剂盒偶氮胭脂红B Biological stain磷酰二肽 纯级Anti-OPN/FITC 荧光素标记骨桥蛋白抗体IgG
禽网状内皮组织增生症病检测试剂盒氯化铋 AR章盐酸盐 98%Anti-OPN/FITC 荧光素标记骨桥蛋白抗体IgG
禽白血病病检测试剂盒氯化铋 CP2,3-丁二酮 Natural，≥99%, FCCAnti-ORX-A/FITC 荧光素标记增食欲素-A/欲激素AIgG
传染性法氏囊病检测试剂盒氯化铋 99.99%
传染性喉气管炎病检测试剂盒氯化铋 99.999%
禽呼肠孤病抗体检测试剂盒二苯磺酸钡 CP聚烯酰 非离子型，分子量：200万-1400万Anti-OTR/FITC 荧光素标记缩宫素受体抗体IgG
转基因玉米品系DAS-40278-9检测试剂盒、PCR-荧光探针法猪生长分化因子2(GDF2)酶联免疫吸附测定试剂盒Human SAFB ELISA Kit磷酸化胰岛素受体底物-1抗体
猪肌酸激酶同工酶MB(CKMB)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human RUNDC3A ELISA Kit白介素28B抗体
猪上皮中性粒活化肽78(ENA-78)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human ABCC1(Multidrug resistance-associated protein 1) ELISA Kit即刻早期应答基因2蛋白抗体
猪蛋白激酶C-η(PKCη)酶联免疫吸附测定试剂盒Human SAFB2 ELISA Kit三磷酸肌抗体
猪前列腺素F(PGF)酶联免疫吸附测定试剂盒Human RUFY2 ELISA Kit白介素18结合蛋白抗体
猪补体成分3a(C3a)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human RYK ELISA Kit草酰琥珀酸脱羧酶抗体
猪胞外氧化物歧化酶(SOD3)酶联免疫吸附测定试剂盒Human ZFHX3(Zinc finger homeobox protein 3) ELISA KitIgLON家族蛋白5抗体
