实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，*通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量（包括定量和相对定量）和定性分析。
主要服务：DNA或RNA的定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术：引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR
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产品名称 |
规格 |
保存 |
货号 |
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沙门氏菌SPP-glgc检测试剂盒、荧光-PCR法 |
50T |
详见说明书 |
BH-P64383 |
组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
使用方法：
一、样品DNA的制备
用自选方法提取细菌样品DNA。注意：DNA纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品DNA，后面的PCR再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备O157:H7标准曲线（以10-10E6这6个10倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。
1. 标记6个离心管，分别为6，5，4，3，2和1号。
2. 用带芯枪头分别加入45 μL纯水（*用带芯枪头，下同）。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用TE缓冲液或纯水10倍梯度稀释到10E7拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至10E7拷贝/μL，建议每次稀释10倍，梯度稀释至10E7拷贝/μL）。
4. 在6号管中加入5 μL 10E7拷贝/μL的O157:H7阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得10E6拷贝/μL的阳性对照。
5. 换枪头，从6号管中取5 μL溶液到5号管中，充分震荡1分钟，得10E5拷贝/μL的阳性对照。
6. 换枪头，从5号管中取5 μL溶液到4号管中，重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。
7. NC管中不加任何阳性对照。
8. 从1-6号管中分别取5 μL和待测样品一起进行定量PCR（见下步），每个样品做3次重复。PCR后得到每个阳性对照稀释样品的荧光PCR Ct值，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。
实验注意事项：
1）RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料，不同的样本有不同要求，实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况；
2）客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号；
3）客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4）样本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
操作流程:
收集基因信息——>设计引物——>PCR ——>回收目的片段——>与载体连接,取得连接产物 ——> 用感受态细胞做转化 ——>接菌——>阳性克隆鉴定(酶切法或PCR)——>质粒抽提——>质粒测序——>测序结果分析——>克隆信息输入数据库——>质粒实物保存。
本品是在室温条件下长期保存用于DNA提取的血液样品的保存液，它通过裂解细胞并高效抑制DNase的活性而达到长期保证DNA分子的完整性。
单纯疱疹病II检测试剂盒3-硝基邻苯二甲酸 96%红荧烯 99%
单纯疱疹病III检测试剂盒3-硝基邻苯二甲酸 99%(R)-3-氨基-1-BOC-哌啶 98%
瘤病检测试剂盒吡唑 99%(R)-(-)-3- 氨基吡咯烷 98%
金属肽酶含血小板反应蛋白7检测试剂盒亚硫酸钙 90%R-1-苄氧羰基－羟基吡咯 95%
金属肽酶含血小板反应蛋白12检测试剂盒四乙基米氏酮 99%三氧化硫-吡啶复合物 97%
角蛋白18-M65检测试剂盒米氏酮 98%(S)-1－叔丁氧羰基－3－氨基哌啶 98%
血管紧张素转化酶2检测试剂盒N-甲基二乙 98%(S)-3-羟基吡咯烷盐酸盐 97%
白介素12 p40检测试剂盒亚油酸甲酯 分析标准品,>99% (GC)丁二酸 AR,99.5%
白介素15检测试剂盒亚油酸甲酯 99%丁二酸 GCS，≥99.5% (T)
白介素16检测试剂盒色标Standard for GC ,≥99% (GC) 丁二酸 CP,99.0%
白介素17检测试剂盒3-巯基酸 99%，用于生化分析腐植酸 黄腐酸FA ≥90％
白介素17A检测试剂盒4-甲氧基苯乙烯 98%己酸二乙氨基乙酯 分析标准品
白介素17B检测试剂盒乙酸甲酯 无水级, 99.5%绒毛膜促性激素 ~5,000-7000 I.U. per mg
白介素17C检测试剂盒甲酸甲酯 Standard for GC,>99%(GC)促性腺素 来源于绝经期妇女尿液 >200 I.U. per mg
PL7抗体；抗苏氨酰tRNA合成酶检测试剂盒二异丁基酮 异构体混合物，97%醋酸铈 99.9%
外信号调节激酶检测试剂盒2,4-二甲基-3-戊酮 98%聚苯乙烯微球 diameter 0.05 - 0.1μm ,2.5% w/v
γ氨基丁酸A型受体检测试剂盒2-庚 98%聚苯乙烯微球 diameter 0.2 - 0.5μm ,2.5% w/v
Ⅷ型胶原α2检测试剂盒3-庚酮 98%聚苯乙烯微球 diameter 0.6 - 1.0 μm ,2.5% w/v
抗膜DNA抗体检测试剂盒2-庚酮 98%聚苯乙烯微球 diameter 1.0 - 1.9μm ,5% w/v
抗着丝点抗体检测试剂盒4-庚酮 98%聚苯乙烯微球 diameter 2.0- 2.9 μm ,5% w/v
抗α-胞衬蛋白抗体IgG；IgA检测试剂盒4-庚酮 分析标准品聚苯乙烯微球 diameter 3.0 - 3 .9μm ,5% w/v
沙门氏菌SPP-glgc检测试剂盒、荧光-PCR法猴基质金属蛋白酶原13 (Pro-MMP-13)酶联免疫吸附测定试剂盒Human C3(Complement C3) ELISA Kit神经纤毛蛋白1抗体
猴骨成型蛋白15(BMP-15)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human LPA(Lipoprotein a) ELISA Kit神经生长因子4/5抗体
猴Nesfatin 1蛋白 (NES1)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human CP(Ceruloplasmin) ELISA Kit巢蛋白NID2抗体
猴胰岛素样生长因子1受体(IGF1R)酶联免疫吸附测定试剂盒Human CEBPD(CCAAT/enhancer Binding Protein(C/EBP), delta) ELISA Kit线粒体钠/氢交换蛋白质2抗体
猴纤维蛋白肽A(FPA)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human BAX(Apoptosis regulator BAX) ELISA Kit神经元素1抗体
猴染色盒同源物3(CBX3)酶联免疫吸附测定试剂盒Human MAPK1(Mitogen-activated protein kinase 1) ELISA Kit神经肽Y抗体
猴甲状腺素抗体(TAb)酶联免疫吸附测定试剂盒Human CTLA4(Cytotoxic T-lymphocyte protein 4) ELISA Kit神经营养因子抗体
