操作流程:
收集基因信息——>设计引物——>PCR ——>回收目的片段——>与载体连接,取得连接产物 ——> 用感受态细胞做转化 ——>接菌——>阳性克隆鉴定(酶切法或PCR)——>质粒抽提——>质粒测序——>测序结果分析——>克隆信息输入数据库——>质粒实物保存。
本品是在室温条件下长期保存用于DNA提取的血液样品的保存液，它通过裂解细胞并高效抑制DNase的活性而达到长期保证DNA分子的完整性。
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产品名称 |
规格 |
保存 |
货号 |
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禽流感病毒H5/H7/H9亚型、AIV-H5/H7/H9检测试剂盒、三重荧光-PCR法 |
50T |
详见说明书 |
BH-P64534 |
组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
使用方法：
一、样品DNA的制备
用自选方法提取细菌样品DNA。注意：DNA纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品DNA，后面的PCR再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备O157:H7标准曲线（以10-10E6这6个10倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。
1. 标记6个离心管，分别为6，5，4，3，2和1号。
2. 用带芯枪头分别加入45 μL纯水（*用带芯枪头，下同）。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用TE缓冲液或纯水10倍梯度稀释到10E7拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至10E7拷贝/μL，建议每次稀释10倍，梯度稀释至10E7拷贝/μL）。
4. 在6号管中加入5 μL 10E7拷贝/μL的O157:H7阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得10E6拷贝/μL的阳性对照。
5. 换枪头，从6号管中取5 μL溶液到5号管中，充分震荡1分钟，得10E5拷贝/μL的阳性对照。
6. 换枪头，从5号管中取5 μL溶液到4号管中，重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。
7. NC管中不加任何阳性对照。
8. 从1-6号管中分别取5 μL和待测样品一起进行定量PCR（见下步），每个样品做3次重复。PCR后得到每个阳性对照稀释样品的荧光PCR Ct值，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。
实验注意事项：
1）RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料，不同的样本有不同要求，实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况；
2）客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号；
3）客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4）样本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，*通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量（包括定量和相对定量）和定性分析。
主要服务：DNA或RNA的*定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术：引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR
糖原磷酸化酶检测试剂盒BOC-L-脯氨酸 99%二甲基氯硅烷 96%
α半乳糖苷酶检测试剂盒BOC-L-谷氨酸 98%二甲基二氯硅烷 CP,扫尾剂
抗酸性磷酸酶5检测试剂盒BOC-L-缬氨酸 99%二甲基二氯硅烷 色谱固定液
抗酸性磷酸酶5检测试剂盒BOC-β-氨酸 98%二甲基二氯硅烷 >98.5%(GC)
免疫球蛋白G Fc段受体III检测试剂盒BOC-D-苯氨酸 99%二甲基二氯硅烷 CP,96.0%
17-酮类固检测试剂盒BOC-D-丝氨酸 98%甲基二氯硅烷 99%
半胱氨酸白三烯受体1检测试剂盒BOC-L-丝氨酸 97%甲基三氯硅烷 99%
脱氢表雄酮检测试剂盒灿烂绿 高纯级,95%2-(1-哌啶基)苯 97%
脱氧胞苷激酶检测试剂盒铋试剂Ⅰ 97%喹唑啉 98%
脱氧吡啶酚;脱氧吡啶啉检测试剂盒铋试剂II CP三氟磺酸钪 98%
脱氧尿三磷酸检测试剂盒铋试剂II 98%四氢-2 2-二甲基-4H-吡喃-4-酮 95%
拓扑异构酶1检测试剂盒考马斯亮蓝G250 AR三(4-溴苯基) 98%
唾液酸检测试剂盒考马斯亮蓝G250 AR，无蛋白酶2-甲酰基噻唑 97%
哇巴因检测试剂盒考马斯亮蓝G250 70%，用于电泳500ml透气不透液垫片 40mm口径 配套42mm口径盖
激活素受体样激酶1检测试剂盒邻氯 GR,99%亚硫酸氢钠甲萘醌 95%
四旋蛋白2检测试剂盒N,N-二乙基羟 98%烟酰 99%
基质衍生因子2检测试剂盒对甲 98%四氯苯醌 98%
基质衍生因子4检测试剂盒环己甲酰氯 98%四螨 分析标准品，98.6%
Thimet脱寡肽酶1检测试剂盒环己烯甲酸 97%3,3’-二没食子酸酯茶黄素 分析标准品, ≥98.0% (HPLC)
硫素三磷酸酶检测试剂盒环己烷羧酸 99%二硫化四甲基秋兰姆 97%
RAS相关蛋白RAB-27A检测试剂盒N-苄氧羰基-L-氨酸 98%二硫化四甲基秋兰姆 分析标准品
禽流感病毒H5/H7/H9亚型、AIV-H5/H7/H9检测试剂盒、三重荧光-PCR法兔E选择素(SELE)酶联免疫吸附测定试剂盒 Anti-CAPN2 Antibody磷酸化p21激活激酶1/2/3抗体
兔半胱天冬酶3(CASP3)酶联免疫吸附测定试剂盒Anti-CAPN2 Antibody前列腺素脱氢酶1抗体
兔血管内皮生长因子(VEGF)酶联免疫吸附测定试剂盒 Anti-CAPN1 Antibody磷酸化蛋白激酶C(T500)抗体
兔免疫球蛋白E(IgE)酶联免疫吸附测定试剂盒Anti-CARD4/NOD1 Antibody磷酸化肿瘤抑制基因P53抗体
兔甘肽/甘素(GAL)酶联免疫吸附测定试剂盒 Anti-Carbonic Anhydrase 13/CA13 Antibody磷酸化p21激活激酶1抗体
兔激肽释放酶7(KLK7)酶联免疫吸附测定试剂盒 Anti-CARD9 Antibody磷酸化p21激活激酶2抗体
兔肝脂酶 (LIPC)酶联免疫吸附测定试剂盒Anti-Cardiotrophin1(CT-1) Antibody磷酸化p21激活激酶3抗体
