实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，*通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量（包括定量和相对定量）和定性分析。
主要服务：DNA或RNA的定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术：引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR
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产品名称 |
规格 |
保存 |
货号 |
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猪传染性胃肠炎/猪流行性腹泻病毒、TGEV/PEDV检测试剂盒、双重荧光-PCR法 |
50T |
详见说明书 |
BH-P64544 |
组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
使用方法：
一、样品DNA的制备
用自选方法提取细菌样品DNA。注意：DNA纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品DNA，后面的PCR再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备O157:H7标准曲线（以10-10E6这6个10倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。
1. 标记6个离心管，分别为6，5，4，3，2和1号。
2. 用带芯枪头分别加入45 μL纯水（*用带芯枪头，下同）。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用TE缓冲液或纯水10倍梯度稀释到10E7拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至10E7拷贝/μL，建议每次稀释10倍，梯度稀释至10E7拷贝/μL）。
4. 在6号管中加入5 μL 10E7拷贝/μL的O157:H7阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得10E6拷贝/μL的阳性对照。
5. 换枪头，从6号管中取5 μL溶液到5号管中，充分震荡1分钟，得10E5拷贝/μL的阳性对照。
6. 换枪头，从5号管中取5 μL溶液到4号管中，重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。
7. NC管中不加任何阳性对照。
8. 从1-6号管中分别取5 μL和待测样品一起进行定量PCR（见下步），每个样品做3次重复。PCR后得到每个阳性对照稀释样品的荧光PCR Ct值，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。
实验注意事项：
1）RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料，不同的样本有不同要求，实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况；
2）客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号；
3）客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4）样本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
操作流程:
收集基因信息——>设计引物——>PCR ——>回收目的片段——>与载体连接,取得连接产物 ——> 用感受态细胞做转化 ——>接菌——>阳性克隆鉴定(酶切法或PCR)——>质粒抽提——>质粒测序——>测序结果分析——>克隆信息输入数据库——>质粒实物保存。
本品是在室温条件下长期保存用于DNA提取的血液样品的保存液，它通过裂解细胞并高效抑制DNase的活性而达到长期保证DNA分子的完整性。
HLA-DRB5检测试剂盒D-哌啶酸 99%十一烷 ≥98%
受体酪氨酸激酶检测试剂盒L-高精氨酸盐酸盐 98%2,2－二甲氧基烷 99%
胰羧肽酶B检测试剂盒DL-高丝氨酸 99%抗坏血酸 AR,99.7%
乙酰胆碱受体检测试剂盒L-高丝氨酸 98%抗坏血酸 USP30
岩藻糖基转移酶2检测试剂盒Fmoc-L-羟脯氨酸 98%硅钼粉 99.8%
抗内膜抗体检测试剂盒磷酸组 99%溴 CP，98.5%
抗滋养膜抗体检测试剂盒L-高苯氨酸 98%溴 ≥99.5%
因子信号转导抑制因子1检测试剂盒1-亚硝基-2-萘酚 96%纳米铁酸钴 40nm 球形 99.5%
因子信号转导抑制因子3检测试剂盒橙黄G BS纳米碳粉 99.5%，30nm
周期素D1检测试剂盒橙黄G AR，≥80.0% (HPLC)四氧化三钴 30nm 球形，99.5%
周期素E1检测试剂盒橙黄G AR，≥80.0% (HPLC)氧化镝 40nm 球形，99.5%
周期抑制蛋白p27;Kip1检测试剂盒橙黄G ≥96%(HPLC)石墨 99%，40nm
细丝蛋白A检测试剂盒油红O Biological stain纳米羟基磷灰石 nanopowder,<100 nm particle size (BET), ≥97%
下游转录因子Gli1蛋白检测试剂盒橙黄Ⅳ Indicator纳米四氧化三铁 99.5%,20nm 球形
D-葡萄糖酸检测试剂盒芴甲氧羰基-L-天冬氨酸-1-叔丁酯 99%钢板铡刀
CD138分子检测试剂盒芴甲氧羰基-L-天冬氨酸-1-叔丁酯 98%移动白板架 240*120加厚型单面磁性白板配加厚型双杠
可溶性淋巴活化基因-3检测试剂盒L-精氨酸对硝基酰苯 98%(+)-樟脑酸 99%
自然杀伤家族2成员D检测试剂盒L-氨酸异酯盐酸盐 99%双(4-)磷酸酯 99%
滑行蛋白α检测试剂盒D-氨酸叔丁酯盐酸盐 99%1，2，4-三氮唑-3-羧酸甲酯 99%
滑行蛋白β检测试剂盒L-天冬酰叔丁酯 95%2,2-双(羟甲基)酸 98%
滑行蛋白γ检测试剂盒2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲四氟酸盐 98%2,2-二羟甲基丁酸 98%
猪传染性胃肠炎/猪流行性腹泻病毒、TGEV/PEDV检测试剂盒、双重荧光-PCR法兔核糖核酸酶III(RNASEN)酶联免疫吸附测定试剂盒 Anti-CCL11 Antibody蛋白酶体PRS7抗体
兔丝氨酸/苏氨酸激酶39(STK39)酶联免疫吸附测定试剂盒 Anti-CCL11 Antibody蛋白酶体PSMα1抗体
兔半乳凝集素8(GAL8)酶联免疫吸附测定试剂盒Anti-CCL11 Antibody蛋白酶体PSMα2抗体
兔封闭蛋白14(CLDN14)酶联免疫吸附测定试剂盒 Anti-CCL13 Antibody蛋白酶体PSMα6抗体
兔维生素D结合蛋白(DBP)酶联免疫吸附测定试剂盒Anti-CCL17 Antibody蛋白酶体PSMα7抗体
兔肿瘤蛋白p63(TP63)酶联免疫吸附测定试剂盒Anti-CCL19 Antibody孕酮诱导阻断因子1抗体
兔血小板膜糖蛋白II b/III a(GPIIb/IIIa)酶联免疫吸附测定试剂盒Anti-CCL18 Antibody多腺苷二磷酸多聚酶16抗体
