称量法:设置移液器量程,用移液器吸取一定体积的去离子水,然后天平称重。根据当时的温度,湿度,气压换算成实际体积,可以得知移液器的准确度。
分光光度法:用移液器吸取已知浓度有色物质,然后加入一定体积纯水中,比色发测定稀释倍数,可推算出移液器准确度。
1、准备纯水、万分之*平(如果校正0.5~2.5ul量程的,至少要十万分的天平)、温湿度计、恒温室,还需准备一个小口容器,防止水分挥发。
2、按移液器量程的*、50%、10%分别进行第三和第四步。
3、吸头要反复吸取纯水三次后,吸取固定容积的纯水,推入放置在天平上的小口容器中,待数据稳定读取天平数值,同时记录温度。重复10次。
4、将测量的数据用iso8655中的计算公式计算获得对应温度下的体积,取平均值。
5、根据三个测量点的偏差,用移液器的校正扳手通过移液器的校正窗进行调整。
6、重复3、4步,直至偏差在ISO8655的要求内为止。
另外,不同的移液器的校正窗和扳手的形式是不同的:
1、Gilson的是在顶端的那个带有小孔的旋钮,标配是不带扳手的,因为Gilson是定期免费校正的。
2、Eppendorf的是在把手的侧边,有的型号是用一个铝箔覆盖,有的是用校正纸片贴住的,标配带有扳手,与拆卸套筒的工具公用。
3、BioHit的与Gilson类似。
如果是电动移液器,那校正就简单多了,一般测量完三个校正点的数据后,直接进入校正界面,将误差数据输入就可以自动校正了。
一般还是交给厂家或者代理商进行校正比较放心,一般地区代都是购买了自动校正平台的,将移液器放在上面,机器自动进行测量和校正工作的。
1.设定移液体积
从大量程调节至小量程为正常调节方法,逆时针旋转刻度即可。从小量程调节至大量程时,应先调至过设定体积刻度,再回调至设定体积,这样可以保证移液器的度
2.装配移液枪头
将移液枪垂直插入吸头,左右旋转半圈,上紧即可。用移液器撞击吸头的方法是非常不可取的,长期这样操作回导致移液器的零件因撞击而松散,严重会导致调节刻度的旋钮卡住
3.吸液及放液,垂直吸液吸头*浸入液面3mm以下,吸液前枪头先在液体中预润洗慢吸慢放放液时如果量很小则应吸头*可靠容器内壁
4.吸有液体的移液枪不应平放,枪头内的液体很容易污染枪内部而可能导致枪的弹簧生锈
5.移液枪在每次实验后应将刻度调至*,让弹簧回复原型以延长移液枪的使用寿命
6.吸取液体时一定要缓慢平稳地松开拇指,绝不允许突然松开,以防将溶液吸入过快而冲入取液器内腐蚀柱塞而造成漏气。
7.为获得较高的精度,吸头需预先吸取一次样品溶液,然后再正式移液,因为吸取血清蛋白质溶液或有机溶剂时,吸头内壁会残留一层”液膜”,造成排液量偏小而产生误差。
8.浓度和粘度大的液体,会产生误差,为消除其误差的补偿量,可由试验确定,补偿量可用调节旋钮改变读数窗的读数来进行设定。
9.可用分析天平称量所取纯水的重量并进行计算的方法,来校正取液器,1mL 蒸馏水20℃时重0.9982g. 所设量程在移液器量程范围内不要将按钮旋出量程,否则会卡住机械装置,损坏了移液器。
10.在设置量程时,请注意:数字清清楚楚在显示窗中, 旋转到所需量程
11.移液器严禁吸取有强挥发性、强腐蚀性的液体(如浓酸、浓碱、有机物等)。
12.严禁使用移液器吹打混匀液体。
13.不要用大量程的移液器移取小体积的液体,以免影响准确度。同时,如果需要移取量程范围以外较大量的液体,请使用移液管进行操作。
一般来说,为防止所吸取体积上出现误差,有一些基本的操作原则必须遵守。对吸取体积误差影响的因素主要有三个方面:①流体静压;②吸头润湿;③流体动力学。当样本体积从毫升范围降低至微升范围时,物理作用力的关系即发生变化,对于加样来说,其意味着液体表面的作用力效应与其体积或质量(例如重力)的作用力效应相比有所增加,因此,加样器生产厂家在设计和构建加样器和吸头中必须仔细考虑这种情况,而且在使用时也必须注意。
流体静压:在吸取液体时,加样器吸头只能浸入液体几毫升以确保与排出液体时相同的流体静压条件,因此,加样器必须以几乎垂直的方式加取液体,因为倾斜的方式将减少液体柱的高度,导致吸取的液体过多。如果加样器在30℃下以垂直方式吸取液体,可吸取至0.15%更多的液体。
吸头润湿:当吸头排空时,仍会有一些残留的液体以薄膜6f形式保留在吸头的侧面,其量取决于液体和吸头表面的相互作用,因此,其是一个常数,但依液体材料的不同而不同。对于水溶液,这种润湿影响在构建加样器时就应考虑。对于蛋白溶液等黏度高的液体,建议在加样前吸打液体数次,以保证加样的一致性。
流体动力学:对体积吸取的第三个影响是从加样器吸头外壁液体的释放,在此过程中,吸头的几何形状起一个关键的作用。为确保加样中的稳定条件,加样器吸头应靠在管壁上,于是,液体可顺着管壁流出,而不出现液滴,液滴的形成可由于其表面张力的作用而阻止液体从吸头中释放。如果吸头安装不正确或使用不相配的吸头,相对加样误差将达到0.4%以上。
移液器的维护保养
1、如较长时间不使用,要把移液枪的量程调至*值的刻度,使弹簧处于松bai弛状态以保护弹簧,不注意此点容易导致活塞无法回弹。
2、如果移液器每天都需要使用,则建议每三个月清洁并校准一次,可以用肥皂水或消毒乙醇,再用蒸馏水清洗,自然晾干。
3、清洁移液器步骤:(按如下操作)
(1) 按说明书拆开移液器。
(2)检查并擦拭灰尘和污迹。
(3) 只能用70%的乙醇擦拭,管嘴连件和推出器可浸泡在肥皂水或者异丙醇溶液中两小时。有替换滤芯的型号产品要及时更换脏掉的滤芯,以保证腔体内的清洁。
(4)活塞、O形环和弹簧涂上硅油(没有硅油凡士林也可)。
(5) 装上并复原移液器。
注意:清洁后的移液器需要校准。
4、校准步骤
4.1 温度要求:移液器校准时必须在室温条件(25+/-2℃)下进行。
4.2 参照移液器的使用说明,不同刻度1000050001000200ul必须分别进行校准。
4.3 将移液头里的气泡排除,选择好需要校准的刻度。
4.4 将一空容器放在精度为0.1 毫克的电子天平上去皮。
4.5 按加液键,将水加入空容器中称重,记录读数。
4.6 按照国标,移液器的校准采用“三点测试(*量程的*,50%和10%),每点六次”的规则,而供应商通常会选择两种规则:一是简易校准,也就是两点测试(*量程的*和10%),每点四次;二是严格校准,也就是三点测试(*量程的*,50%和10%),每点十次。使用者根据自己的实际需求选择一种规则完成测试后即进入计算环节。(根据平均值与实际值间的*差值进行调节,用工具来拧弹簧卡扣的松紧)
5、高温消毒之前,要确保移液器能适应高温。
6、通过重复几次秤量蒸馏水的方法来进行。
7、使用时要检查是否有漏液现象。方法时吸取液体后悬空垂直放置几秒中,看看液面是否下降。如果漏液,原因大致有一下几方面:
1)枪头是否匹配;
2)弹簧活塞是否正常;
3)如果是易挥发的液体(许多有机溶剂都如此),则可能是饱和蒸汽压的问题。可以先吸放几次液体,然后再移液。
公司可提供如下个方面的检测能力:
1、洁净室(区)及相关受控环境
2、生物安全实验室
3、实验动物环境及设施
4、医院受控环境(手术室、辅助用房、ICU病房等)
5、电子信息系统机房环境
6、生产环境卫生指标
7、物料储存环境(仓库)
8、设备、管道空气过滤系统已安装过滤器完整性
9、洁净工作台(包括层流罩、采样车、隔离器等局部净化设备/装置)
10、生物安全柜