一步法大提质粒DNAout
产品及特点 本产品是在天泽基因一步法质粒DNAOUT 2.0(CAT#:70903)基础上开发的、能够快速从100 mL左右的E.coli培养液中取质粒DNA的产品。它只需要一种溶液即可以完成细菌裂解,并且裂解物可以直接上柱纯化质粒DNA。它比经典的碱变性质粒制备方法更加快捷和方便。本产品的主要特点是:
1. 快速,整个质粒DNA提取过程只需要不到30分钟,比传统的碱变性方法快捷。
2. 螺旋比例高,独创的非碱法一步式细菌裂解技术,避免了强碱对DNA的损害,得到的质粒DNA切口更少。
3. DNA纯度高,几乎没有基因组DNA和RNA污染,OD260/280一般在1.7-1.9之间。
4. DNA可以直接用于电泳、酶切、PCR、细菌转化、分子克隆等实验。
5. 大吸附量为600 ug DNA,具体产率取决于质粒拷贝数。
6. 过程简单,重复性和稳定性好。
规格及成分 成 份 5次包装
溶液A 100 mL
大离心吸附柱 5套
通用预洗液 100 mL
通用洗柱液 100 mL
DNA洗脱液 10 mL
使用手册 1份
运输及保存 常温运输及保存(溶液A需要4℃保存),有效期一年。
自备试剂 无
使用方法 1. 用50 mL离心管分数次收集10-100 mL新鲜的菌液,一般可以5000 rpm 离心10分钟,去除上清即得细菌沉淀。
2. 往细菌沉淀中加入20 mL溶液A,充分振荡悬浮或吹打混匀。注意:充分重悬细胞沉淀(无块状物)对于获得高的质粒产量十分重要。
3. 将裂解液全部转移到大离心吸附柱中,放入到配套的收集管中。
4. 6000 rpm 离心5-10 分钟,弃穿透液。离心过滤柱将吸附溶液中的质粒DNA,而将基因组DNA 和杂质在穿透液中。如果离心吸附柱中还有未离心下去的裂解液,可以适当延长离心时间直到离心吸附柱中没有残留液体。
5. 将10mL 通用预洗液加入到离心吸附柱中,室温静置2 分钟后6000 rpm 离心5分钟,弃穿透液。
6. 重复上步一次。
7. 将10mL通用洗柱液加入到离心吸附柱中,室温静置2 分钟后6000 rpm 离心5分钟,弃穿透液。
8. 重复上步一次。
9. 室温6000 rpm 空甩5分钟,弃穿透液。注意:此步很重要,不能跳过。
10. 将离心吸附柱放入一个自备的、干净的50 mL塑料离心管中,加1 mL通用洗脱液(洗脱液如加热到50-65℃效果更佳),室温静置2分钟后6000 rpm 离心5分钟,收集液即是质粒DNA溶液。
11. 重复上步1次以便洗脱更多的质粒DNA。
12. 合并所得质粒DNA,立即使用或-20℃储存。