郴州桂阳县第三方仪器计量机构-*校正

郴州桂阳县第三方仪器计量机构-*校正

以江苏为地基，辐射长三角地区，围绕本地化市场服务的需求，在仪器检测校准、证书等领域拓展合作方式、优化自身服务举措，进一步提高服务响应机制，目前已经于上海、南京、杭州、浙江、福建等众多长三角企业建立长期合作关系，服务上千家中外企业客户。

一、本公司服务范围：

长度类: 卡尺、千分尺、钢直尺、卷尺、角度尺、百分表、量块、平板、投影仪、2次元、2.5次元、3次元、显微镜、膜厚计、DIN磨耗试验机、计码器、高度规、针规、环规、塞尺、划格刀、半径规、螺纹样版、真圆度仪、粗糙度计、轮廓测试仪、…….

热工类: 恒温恒湿机、温湿度计、盐雾机、烤箱、玻璃温度计、红外线温度计、低温箱、炉温测试仪、多点、耐黄变试验机、烙铁温度计、环境试验箱、冷热冲击试验机、温度巡回检测仪、洗衣机、融溶指数试验机、加热变形试验机、恒温水槽、环境试验箱…….

　质量管理体系中计量管理工作的实施要点

与校准不同

根据以往的工作经验以及我国的相关法律规定，企业必须定期对计量工具和检测设备进行。是一种强制性的行政行为，主要是通过可以发现测量仪器是否符合相关的法律政策，并不等同与校准。校准是通过较准链或者比较链来找到计量仪器等其他仪器的误差值，与有着本质上的区别。对于*法律规定的计量仪器，我们必须严格按照法律要求定期送到有关部门进行，对于*没有强制规定的计量仪器，企业内部需要定期进行校准。

 

“基因扩增仪”的诞生和发展

  

核酸体外扩增的设想*早是由Khorana在1971年提出的。“经DNA变性，与合适的引物杂交，用DNA聚合酶延伸引物，并不断重复该过程便可合成tRNA基因。”

然而当时还没有成熟的基因序列分析方法，也没有热稳定DNA聚合酶以及引物合成操作很困难。这种设想达不到实际的效果。并且在70年代初出现了分子克隆技术，一种克隆和扩增基因的途径被提供了，因此人们遗忘了Khorana的设想。

1983年4月的一个星期五晚上，Kary Mullis开车去乡下别墅的路上,猛然闪现出“多聚酶链式反应”的想法；

1983年12月，Mullis用同位素标记法看到了10个循环后的49 bp长度的diyi个PCR片段；

1985年，Mullis在Cetus公司工作期间，发明了PCR。Mullis要合成DNA引物来进行测序工作，却常为没有足够多的模板DNA而烦恼；

1985年10月25日申请了PCR的，1987年7月28日批准（号4,683,202 ），Mullis是diyi发明人；

1985年12月20日在Science杂志上发表了diyi篇PCR的学术论文，Mullis是共同作者；

1986年5月，Mullis在冷泉港实验室做专题报告，全世界从此开始学PCR的方法。

根据PCR原理，商业公司在PCR仪的基础功能上不断进行创新和改进。至今，PCR仪已经更新至第三代技术。为方便读者朋友理解，本文将对三代PCR仪的原理、特点、主要厂商及产品、应用领域做一系统梳理。

标准PCR仪也叫做终点PCR仪，是指目的基因仅经过预变性、变性、退火、延伸阶段产生大量的核酸序列的PCR仪，PE-Cetus公司推出的世界上*台PCR自动化热循环仪属于此种。根据PCR退火温度和扩增条件(细胞内/外)，标准PCR又可以分为三类：普通PCR、梯度PCR和原位PCR。

第二代——qPCR(实时定量PCR)

1996年Applied Biosystems(现被赛默飞收购)公司推出了实时荧光定量PCR(RTFQ PCR)技术，并发明了世界上*台荧光定量PCR仪，开始了从定性到定量的跨越。

实时定量PCR仪是指在PCR反应体系中加入能够指示DNA片段扩增过程的荧光染料(SYBR Green等)或荧光标记的特异性的探针(TaqMan Probe等)，在普通PCR仪设计基础上增加荧光信号激发和采集系统和计算机分析处理系统，形成了具有荧光定量PCR功能的仪器，通过对PCR过程中产生的荧光信号积累实时监测整个PCR过程，再结合相应的计算机软件对所获得的荧光信号数据进行分析，计算待测样品特定DNA片段的初始浓度。

目前根据荧光信号反应样品浓度主要有两种方法：

1.Taqman探针法

探针两端分别为报告荧光基团R和荧光淬灭基团Q，当探针完整时，R发出的荧光被Q吸收，检测不到荧光信号。探针随机结合到DNA单链上，PCR扩增时，探针被水解，R与Q分离，R发出的荧光就会被检测到。每扩增一条DNA链都会生成一个荧光分子。

2. SYBR Green Ι染料法

SYBR Green Ι是一种只有在和双链DNA结合时才会发荧光的染料。在PCR变性时，无荧光产生，到了复性和延伸阶段则能检测到荧光信号。

实时荧光定量PCR仪主要应用于病原体检测、药物疗效考核、肿瘤基因检测、基因表达研究、转基因研究、单核苷酸多态性(SNP)及突变分析等细分研究方向，广泛应用于临床医学检测、生物医药研发、食品行业等研究领域。

第三代——dPCR(数字PCR) 

不同于qPCR 对每个循环进行实时荧光测定的方法，数字 PCR 技术是在扩增结束后对每个反应单元的荧光信号进行采集。

数字PCR是一种基于PCR反应(聚合酶链反应)的单分子*定量技术。如图1，在数字PCR的过程中：

(a) PCR反应体系(含有荧光染料或探针)被分割为数以万计的均一微液滴，

(b) 其中部分微液滴内会含有一个或多个模板，

(c) 将这些微液滴收集到试管内进行PCR反应，其中含有模板的微液滴会产生扩增产物，由此具有较强的荧光，成为阳性微液滴，

(d) 在PCR反应完成后，依次对每个微液滴内的荧光进行检测，

(e) 根据微液滴信号的峰值高度，绘制出微液滴荧光分布的散点图，

(f) 通过合理的荧光分类阈值将微液滴内的荧光强度数字化，判断出其中具有较强荧光的阳性微液滴(图1f中绿色的数据点，称为“1”)和具有较弱荧光的阴性微液滴(图1f中蓝色的数据点，称为“0”)，并通过“1”和“0”的个数来实现*定量。因此，与实时定量PCR不同，数字PCR不需要使用标准曲线，即可直接对核酸拷贝数的*值进行定量。

*通过直接计数或泊松分布公式计算得到样品的原始浓度或含量。

迄今为止，目前市面上常见的数字PCR仪器主要有两种，根据微反应的形成原理不同，主要分为 “芯片数字PCR”与“微滴数字PCR”两类。

1.芯片数字PCR

液滴数字PCR源于乳液PCR( emulsion PCR) 技术，即将DNA模板与连接引物的磁性微球以极低的浓度(比如单拷贝) 包裹于油水两相形成的纳升至皮升级液滴中进行 PCR 扩增，扩增后的产物富集在磁性微球上，收集破乳后进行测序。通过油水两相间隔得到的以液滴为单位的 PCR 反应体系，比微孔板和 IFC 系统更容易实现小体积和高通量，而且系统简单，成本低，因此成为理想的数字PCR技术平台。

数字PCR技术主要应用于不稳定性分析、肿瘤早期研究、产前诊断、致病微生物检测、癌症标志物稀有突变检测等研究领域，也用于验证NGS中的低频突变、 DNA甲基化检测、突变多重检测等方向。

1、结构

外壳、供电系统、电子控制系统、加热系统、制冷系统、散热系统、变温反应腔、外壳以及人机界面等共同构成了基因扩增仪。

2、原理

PCR技术的本质是体外核酸扩增，加热使双链DNA解开螺旋，在退火温度条件下引物同模板DNA杂交，在Taq DNA聚合酶，dNTPs，Mg2+和合适pH缓冲液存在条件下延伸引物，重复 “变性→退火→引物延伸”过程至25～40个循环，呈指数级扩大待测样本中的核酸拷贝数。

实验室地址

东莞部：广东省东莞市道滘镇厚德上梁洲工业区四横路7号

：江苏省苏州市昆山开发区昆嘉路379号

重庆世通：重庆市北碚区万宝大道184号3楼

各分部地址

西安世通：陕西省西安市高陵区融豪工业城中小企业创业示范园第11座

新乡世通：河南省新乡市红旗区互联网大厦606

晋江世通：福建省泉州市晋江市陈埭镇下埭双龙路新消防中队旁恒宇仪器

中山世通：广东省中山市东区起湾道65号亨丰商务中心6楼605室

惠州世通：广东省惠州市惠城区江北云山西路2号帝景国际商务中心B座2007号

常州世通：江苏省常州市武进区万达中心29楼15号

成都世通：四川省成都市龙泉驿区简华侨东路招商·依云上城二期

佛山世通：佛山市顺德大良清晖路新基孵化园四层D16室

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