ELISA是一种广泛应用在测定液体样本中的蛋白、抗体、或激素的免疫分析技术。酶联免疫吸附试验的标准程序,通常是把蛋白、抗体、或激素等(即抗原)直接或是以捕捉抗体(capture Ab)固定在固相载体上,再加入一级检测抗体(primarydetection Ab),形成一个抗原抗体的复合物。如果该抗体已经用酶(enzyme)标记了,即可用来直接测定抗原的量,若无,则可利用另一个酶标记的二级抗体来测定抗原的量。测定抗原量的方法是加入该酶的底质(substrate),作用后产生出现的颜色深浅和样本中的抗原量呈正比的关系,依此原理计算出样本中的抗原量或浓度。
ELISA实验以灵敏度较高、特异性较好的特点得到了广泛的应用,但操作中的各个环节对试验的检测效果影响较大,如不注意,有可能导致出现非常弱的结果、显色不全、花板等结果。下面就ELISA试验出现非常弱的结果,常见有7种原因,其解决方法如下:
1、可能原因:温育的时间或者温度不够;
解决方法:校正温育箱温度。
2、可能原因:显色反应时间太短;
解决方法:校正定时钟准确定时。
3、可能原因:所用配制缓冲液的蒸馏水有问题;
解决方法:使用新鲜合格的蒸馏水。
4、可能原因:加入抗体/酶的稀释液浓度太低;
解决方法:按照说明书保存试剂盒和准确配制工作液。校正移液器,吸嘴要配套,装吸嘴时要紧密。
5、可能原因:酶标仪滤光片不正确;
解决方法:检查酶标仪使用的滤光片。
6、可能原因:试剂盒没有充分平衡;
解决方法:试剂室温平衡至少20分钟,确保所有试剂已平衡至室温。
7、可能原因:不正确的试剂储存方式;
解决方法:按照说明书要求保存试剂盒。