为了确保ELISA测定的特异性,洗板可清除非特异性结合物质,减少背景信号,增加分析的信噪比。
手工洗板时,拍板要垂直,避免交叉污染,用力不能过猛,防止抗原抗体复合物脱离。使用半自动洗板时,应经常检查冲洗头是否通畅,若被杂物堵塞时可用注射器针头挑出。为了达到较好的洗涤效果,实验室可采用机器与人工洗涤相结合的方法,即在机器洗涤后再进行人工洗板1-2次。
以HRP作为标记酶的ELISA试剂盒中使用的洗板液一般为含0.05% Tween20的中性PBS,其中,吐温20的浓度可在0.05%-0.2%之间,高于0.2%时,可使包被在固相上的抗原或抗体解吸附而减低实验的灵敏度。
ELISA实验洗涤技巧:
1、板要平整,尤其是在用洗板机洗板的过程中,往往是3排一起洗,如果板不平,就很可能造成洗液有残留,从而导致非特异性结合不能清除干净,对实验结果造成干扰。
2、洗液温度,实验表明,洗液温度也会影响洗板的干净程度,尤其是冬天温度过低时容易出现“花板"问题。因此,*保持室温在20℃-30℃。
3、洗液要注满孔,孔壁洗涤不干净也易造成“花板"现象。
4、洗液要新鲜配置,洗液要临用前新鲜配制,放置时间过长易产生絮状物或混浊,造成赌孔或花板。
5、洗板次数不够或洗涤间隔时间过短也会造成由于洗板不净而造成“花板"。