PCR基本反应步骤

发布时间:2023-02-23

PCR利用DNA分子会在体外95°高温时会发生变性解旋变成单链,然后降温到60°C左右时引物会与单链DNA按碱基互补配对原则结合,接着再升高温度到72°C左右,即DNA聚合酶*适反应温度,DNA聚合酶会沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成相应的互补链,如此循环往复以达到DNA分子扩增的目的。将微量目的DNA片段扩增一百万以上,它以敏感度高,特异强,产率高,重复好,以快速简便优点迅速成分子生物学研究中*为广泛的方法。

PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成:

1、模板DNA的变性:模板DNA经加热至94℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应做准备;


2、模板DNA与引物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;


3、引物的延伸:DNA模板--引物结合物在Taq酶的作用下,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链。


重复循环变性--退火--延伸三过程,就可获得更多的“半保留复制链",而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2~4分钟, 2~3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。


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