RNA提取实验细胞或组织破碎步骤
发布时间：2023-03-07
RNA提取实验细胞或组织破碎步骤：
1. 微生物材料
（1）发酵3~4天（或对数生长期）的菌体，离心收集菌丝体（动植物材料无需此步处理）。
（2）用经DEPC处理的水洗菌丝体2~3次，并尽量除去残存的水。
（3）加液氮充分研磨，使其成为粉末，以释放RNA。
（4）研磨后的样品转移至12 ml 变性液的容器中匀浆。
2. 动植物细胞培养材料 （适用的样品量为细胞：108）
（1）细胞或组织培养：按常规方法进行。
（2）深层悬浮培养细胞的破碎。
①细胞收集：含一定浓度的细胞培养液置于无菌离心管中，4℃，3 000 g 离心5分钟。
②细胞洗涤：上步沉淀用25 ml 灭菌后冰冻的1xPBS缓冲液洗涤，然后4℃，3 000 g 离心5分钟。
③细胞破碎：在沉淀细胞中加入15 ml 预冷的变性液，用无菌处理过的匀浆器匀浆。
3. 表面培养细胞的破碎
（1）确定培养瓶数量，使选定的各培养瓶细胞累加后量达108。
（2）细胞收集：将培养液倒掉，用预冷的无菌PBS缓冲液洗涤一次，在培养瓶中加入8 ml 预冷变性液。
（3）转动培养瓶，使细胞溶解，此时可见粘度加大。
（4）用无菌吸管将*个培养瓶中的液体吸入第二个培养瓶，旋转，溶解细胞，再吸入第三个培养瓶，以此类推。
（5）直到将所选定的培养瓶全部洗涤一次，然后从*个培养瓶开始再加入4毫升上述变性液，将所有培养瓶洗一次。
（6）将上述12 ml 含细胞的变性液转移至一50 ml 无菌离心管中，匀浆破碎细胞。
4. 植物组织破碎 （适用的样品量为0.05 g 组织）
（1）将600 ul 变性液置于1.5 ml 离心管中，将此离心管放于冰浴中5分钟。
（2）将0.05 g 新鲜组织用液氮冰冻。
（3）在液氮下，研磨组织块。
（4）待液氮挥发后，将上述分散的组织转移至无菌离心管中。
5. 动物组织破碎 （适用的样品量为1 g 组织）
（1）将12 ml 变性液置于50 ml 离心管中，将此离心管放于冰浴中5分钟。
（2）在上述管中加入1 g 新鲜或冰冻动物组织，匀浆粉碎。
