组织样本：(组织样本一般是制成组织匀浆)
处理方法：
1)取适量组织块，于预冷 PBS(0.02mol/L, pH 7.0-7.2)中清洗去除血液， 称重后备用(组织块较大需先剪碎后再匀浆)；
2)可同时选用多种匀浆方法达到较好的破碎效果：首先将组织块移入玻璃 匀浆器，加入 5-10ml 预冷 PBS(组织与 PBS 的质量体积比建议为 1:5，即 1g 样 本加入 5ml PBS)进行充分研磨(有条件实验室可选用机器匀浆)，该过程需在冰 上进行；得到的匀浆液可再利用超声破碎或反复冻融进一步处理(超声破碎过 程中注意冰浴降温；反复冻融法可重复 2 次)。
3)将制备好的匀浆液于 5000×g 离心 5 分钟，留取上清即可检测。
4)如果样本需要长期保存，请添加蛋白酶抑制剂。根据实验需要，组织匀 浆样本可先定量蛋白,以便于统计分析数据。某些组织样本如肝脏，肾脏，脑 组织会有假阳性反应。
细胞样本：
根据目的物所在部位，可选择细胞裂解液或细胞培养上清作为样本。需要注意的是：
因该类样本干扰因素较多，所以可能存在检测不出的情况。
如果目的物是分泌型，主要在胞外，即可选择细胞培养上清作为样本；
如果目的物主要存在于胞内，则建议选择细胞裂解液作为样本类型。
处理方法：
细胞培养上清：处理方法相对简单，取细胞培养上清，1000×g 离心 20 分 钟，取上清即可检测。
细胞裂解液：
1)贴壁细胞需要先用胰酶消化，离心收集细胞(悬浮细胞可直接离心收 集)
2)将收集到的细胞用冷 PBS 洗 3 次
3)物理方法裂解细胞(可先超声破碎细胞，再反复冻融)：
i 超声破碎：取适量 PBS 重悬细胞，用一定功率的超声波处理细胞 悬液，使细胞急剧震荡破裂；
ii 反复冻融：将待破碎的细胞在-20 度以下冰冻，室温融解，反复 3 次，使细胞溶胀破碎；
4)将标本于 2-8 度 1500×g 离心 10 分钟，收集上清备用。
一般情况下，物理方法如反复冻融，匀浆等方法会比化学方法好，因为化 学方法会引入酸或碱，可能会对 elisa 实验产生影响。我们也做了相关实验来评 测化学提取液和洗涤剂对 ELISA 检测的影响，如 RIPA、TritonX-100、NP-40 和 SDS、脱氧胆酸钠、β巯基乙醇、DTT。
