标准曲线法也称为外标法或直接比较法，是一种简便、快速的定量方法，在ELISA实验中比较常用的一种分析方法。ELISA试剂盒做标准曲线样品检测时有几个问题需要注意:
1、样品的浓度等指标是根据标准曲线计算出来的，所以首先要把做标准曲线看作是比做正式实验还要重要的一件事，否则后面的实验结果无从谈起。
2、设置标准曲线样品的标准浓度范围要有一个比较大的跨度，并且要能涵盖你所要检测实验样品的浓度，即样品的浓度要在标准曲线浓度范围之内，人ELISA试剂盒包括上限和下限。而对于呈S型的标准曲线，尽量要使实验样品的浓度在中间坡度*陡段，即曲线几乎成直线的范围内。
3、采用倍比稀释法配制标准曲线中的标准样品浓度，这样就能够保证标准样品的浓度不会出现较大的偏离。
4、检测标准样品时，应按浓度递增顺序进行，以减少高浓度对低浓度的影响，提高准确性。
5、标准曲线的样品数一般为7个点，但至少要保证有5个点。
6、做出的标准曲线相关系数因实验要求不同而有所变动，但一般来说，相关系数R至少要大于0.98，对于有些实验，至少要0.99甚至是0.999.
