细胞冻存和复苏是细胞培养技术里面容易出问题的部分，因此必须注意以下几点：
1. 注意无菌操作。
2. 取细胞的过程中可能会接触液氮，一定注意带好防冻手套，护目镜。
此项尤为重要，如果冻存管密封不严，细胞冻存管可能漏入液氮，解冻时，在水浴中摇晃，冻存管中的气温急剧上升，可导致爆炸，所以，一定要戴保护眼镜和手套，复苏过程中应盖上恒温水浴锅的盖。
3. 应在1-2min内使冻存液*融化。如果复温速度太慢，则会造成细胞损伤。另外，细胞复苏后的操作Hao在4℃冰浴中进行，以减少冷冻保护剂对细胞的毒性。
4. 复苏过程中，升温的速率要大，把从液氮取出的细胞在短的时间内放入水浴锅。
5. 离心前须加入少量培养液。细胞解冻后二甲基亚砜浓度较高，注意加入少量培养液可稀释其浓度，以减少对细胞的损伤。
细胞贴壁少的问题：教科书中说明冻存细胞解冻时1ml细胞液要加10ml-15ml培养液，经验结，培养基越少细胞越容易贴附。
复苏细胞分装的问题：复苏1管细胞一般根据情况可分装到1-2只培养瓶中，分装过多，细胞浓度过低，不利于细胞的贴壁。
加培养基的量放入问题：这个量的的把握主要涉及到的问题是DMSO的浓度，从如果加培养基的太少，DMSO的浓度就会比较大，就会影响细胞生长，从以前的资料来看，DMSO的浓度在小于0.5%的时候对一般细胞没有什么影响。还有一个说法是1%。所以如果冻存液的浓度是10%DMSO，那么加10ml以上的培养基就恰好稀释到了无害浓度。
